ELECTROFORESIS - LABORATORIO DE GENÉTICA GENERAL

ELECTROFORESIS

RAMOS RIVERA leonardo enrique (1005525299)

leonardoramos.2014@outlook.com

LABORATORIO DE GENÉTICA GENERAL

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA

27/11/17[pic 2]

RESUMEN

La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica, cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran. Como consecuencia, se desplazan cuando se ven sometidas a un campo eléctrico. Se denomina electroforesis a la técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico. Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos. Se tienen dos muestras de DNA extraídas por métodos  diferentes  ambas se colocaron en los pozos correspondientes del gel de agarosa de electroforesis se le  y todas las muestras presentes luego se le agrego buffer de carga  bromofenol (Se trata de un compuesto coloreado y con carga, utilizado para comprobar el progreso de la electroforesis) y por ultimo buffer TAE O TBE Molécula responsable del tamponamiento. Regulación del pH contribuye a ajustar el pH deseado e igual que el anterior, a mantenerlo.[pic 3]

Palabras claves: electroforesis, tampón peinillas bromofenol, carga negativa, carga eléctrica, micropipeta.

OBJETIVOS GENERALES

Separar las biomoleculas de DNA mediante diferencias de cargas.

Saber el funcionamiento  de la técnica electroforesis.

Conocer la función de los reactivos bromofenol, buffer TAE o TBE.

Funcionalidad del gel de agarosa.

METODOLOGIA.

Equipos: estufa,  plancha de calentamiento, fuente de poder, cámara de electroforesis, soporte para preparación de geles de agarosa, peinillas, pipetas y micropipetas.

Reactivos: Buffer TAE o TBE agua desionada, agarosa, DNA Buffer de carga azul,(bromofenol)  colorante. DNA muestras.

PROCEDIMIENTO

Preparar un gel de agarosa  50 mL de gel colocar la preparación en la estufa  hasta gelificar hasta que tome una apariencia viscosa. Esperar 20 min.

Agregar  5 mL   de TAE sobre el gel en los sitios donde se encuentra insertada la peinilla.

Agregar las muestras de ADN genómico 10 uL (microlitros) y marcar las muestras agregando 5 uL de marcador

Agregar Buffer a la cámara TAE hasta cubrir completamente el gel

Se tapa la cámara  de conecta la cámara a un voltaje 120 V por 12 cm el cual me media.

Se dejó 30 minutos en la electroforesis  luego de pasado el tiempo se apagó.

Sacra los geles en donde estaban contenido  y se llevó a la cámara oscura  donde se pretendía  ver es desplazamiento de las moleculas de DNA.

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Fig. 1 procedimiento de la técnica electroforesis.

RESULTADOS

Durante la practica el objetivo principal fue separar las moleculas  de DNA mediante diferencias de cargas la cual la técnica de electroforesis permite esta separación. Se observó un desplazamiento de moleculas

Esta técnica se utiliza un gel de agarosa con buffer especial el cual permite el movimiento o paso La electroforesis en gel de agarosa, se utiliza comúnmente para separar moléculas en función de su carga, tamaño y forma. Se trata de un medio de separación especialmente eficaz para las biomoléculas cargadas como el ADN, el ARN y las proteínas. A pesar de que la electroforesis en gel de agarosa sea una técnica simple y fácil, posee dotes de separación eficaces.

Para realizar la electroforesis se empleó reactivos tales como bromofenol un tampón o buffer TAE o TBE muestras de DNA y micropipetas, primeramente se tenía realizado el gel de agarosa  seguidamente se procedió a tomar con ayuda de una micropipeta  2.5 μl de bromofenol y se depositó en un pozo correspondiente luego se depositaron  10  μl de una de las muestras de DNA en el pozo y así en todos los pozo del gel hechos por la peinilla siguiendo el anterior proceso.

Función del bromofenol? Corresponde a tampón de carga.

Compuesto coloreado y con carga, utilizado para comprobar el progreso de la electroforesis, El azul de bromofenol es muy usado como tinte del frente de avance en electroforesis, en la determinación de masas moleculares de proteínas mediante Electroforesis en Gel de poliacrilamida (SDS-Page) y en la masa molecular de ADN mediante electroforesis de gel de agarosa.

Función del buffer TAE o TBE?

Es el medio usado para preparar el gel y desarrollar la electroforesis. Recibe este nombre de las iniciales de sus componentes. El pH es alcalino, para que todos los grupos fosfato del DNA estén ionizados por completo y éste se mantenga cargado negativamente. La composición habitual es Tris 40 mM, ác. acético 19 mM, EDTA 1 mM, pH=7,5. En la electroforesis, permite mantener las moléculas de DNA con una carga negativa uniforme y constante. Es, por ello, componente del gel y del tampón de electroforesis, o tampón de cubeta.

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