Hidrólisis ácida del almidón y extracción e identificación de las lecitinas y el colesterol a partir de la yema de huevo de gallina

Universidad Nacional Autónoma de Honduras en el Valle de Sula

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Integrantes: Adolfo Josué Madrid                   20112001517

                        Zúrich Rodríguez                         20122000977

Asignatura: Laboratorio Bioquímica

Instructor: Bryan Rosales

Tema: Hidrólisis ácida del almidón y extracción e identificación   de las lecitinas y el colesterol a partir de la yema de huevo de gallina

Fecha: 18 de abril ,2016

OBJETIVOS:

• Extraer y separar lecitinas y colesterol a partir de la yema de huevo de gallina para su posterior identificación mediante sus características físicas y la prueba de Lieberman Burchard para el colesterol.

• Realizar una hidrólisis ácido del almidón identificando la naturaleza de sus monómeros.

                                                  Introducción

La lecitina es un término genérico para designar a un amplio grupo de lípidos saponificables y con función de emulgente que se producen de manera natural en tejidos animales y vegetales. Engloba a cualquier grupo de sustancia grasa (de color amarillo-marronáceas) compuesta de ácido fosfórico, colina, ácidos grasos, glicerol, glicolípidos, triglicéridos y fosfolípidos.  En el laboratorio se extrajo a partir de la yema de huevo de la gallina  lo que son las lecitinas que son de  naturaleza lipídica usando éter de petróleo  y aislándolas como un precipitado del colesterol que también se encuentra en la yema del huevo,  mediante la acetona.

La identificación del colesterol se realiza por medio de la reacción de color de Liebermann Burchard. Ésta reacción se realiza en general en un medio ácido fuerte constituido por ácido sulfúrico, ácido acético y anhídrido acético. Todo esto constituye la primera parte de la práctica.

En la segunda práctica se realizó de manera fragmentada la hidrólisis ácida del almidón. Este proceso se analizó tanto en tubos de ensayo grandes y microtubos al mismo tiempo. La hidrolisis se realizó a partir de una solución de almidón con ácido clorhídrico para luego agregar por porciones a los tubos de ensayo junto con el reactivo de yodo para así observar como varia las intensidades de color del complejo yodo – almidón. Finalmente el almidón  descompuesto en sus monómeros estaría listo para la prueba de fehling en relación a los carbohidratos.

Procedimiento Experimental

Parte A. Obtención e identificación de Lecitina y colesterol a partir de la yema de huevo de gallina

1. Se peso un beaker de 250 ml y se rompió un huevo, se separó la yema, se vacío en el beaker y se pesó la yema.

 2. Se añadió  una mezcla de 50 ml de etanol y 25 ml de éter  hasta cubrir totalmente la yema y se agito con una varilla de vidrio para homogenizar bien, con cuidado durante dos minutos.

Resultado: mezcla parcialmente soluble, los lípidos o grasas son extraídos.

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3. Se agrego  lentamente y sin dejar de agitar, un volumen de acetona igual al de la mezcla.

 Resultado: Se observó inmediatamente un precipitado.

 4. Se dejo reposar la mezcla por 10 minutos.

5. Se filtro sobre un papel  filtro humedecido con etanol.

Resultado: Solido retenido de coloración Amarillo totalmente seco.

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6. Se lavo el residuo que quedó en el papel de filtro con alcohol etílico bien frío.  

7. Se dejo secar un poco y luego se llevo el residuo a la estufa hasta sequedad.

Resultado: el residuo que quedo en el papel filtro se tornó algo grisáceo, es decir bajo su color Amarillo.

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8. Se evaporo el filtrado lentamente en un baño de vapor y se pesaron los precipitados.

Resultado = mientras se evaporaba se percibió el olor del éter que se estaba evaporando.

Datos

Peso del beaker = 23.86 g.

Peso del beaker + filtrado evaporado = 116.8 g. [pic 5][pic 6]

[pic 7][pic 8][pic 9]Contenido de colesterol = 18.2 g.

9. Se tomo el residuo del filtrado evaporado y se agrego 2.5 ml de KOH alcohólico al 33% y se llevó a baño maría a 37-40 °C durante 20 minutos.

Resultado: Consistencia algo pastosa

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10. Se enfrió y  adiciono 5 ml de éter de petróleo, mezclando bien. Luego se adiciono  2.5 ml de agua destilada.Se agito vigorosamente por 1 minuto y se centrifugo  a baja velocidad por cinco minutos.

Resultado: Dos fases de capas (capa de la superficie es amarilla y la del fondo algo rojiza)

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11. Se tomo la capa etérea y se agrego a ésta, después de enfriar, se agrego 3 ml del reactivo de Liebermann-Burchard modificado.  

Resultado: Coloración verde muy oscuro.

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Parte B. Hidrólisis ácida del almidón:

1. Se coloco en una gradilla 10 tubos de ensayo numerados.

2. Se numero por aparte, 10 microtubos de ensayo.

3. En un beaker de 50 ml  se colocó 25 ml de una solución de almidón al 1%.

4. Se añadió  10 gotas de ácido clorhídrico concentrado y se agito  suavemente.

5. Con un gotero se tomó un poco de esa solución y se colocó una gota de ella en el primer microtubo y 3 gotas en el tubo #1 de la gradilla.

6. Se encendió  la estufa y se colocó el beaker con la solución sobre la tela de asbesto para calentarla hasta que hirviera. El hervor debe ser suave.

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