INFORME 4 MICROBIOLOGIA.

Elaboración del patrón de Mcfarland y Medición de concentración bacteriana por Turbidimetría

Arboleda eduar, Castañeda Daniel, pastrana camilo y salamanca yesit

Fundación Universitaria de San Gil UNISANGIL – Sede Yopal

Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniería

Programa Ingeniería Ambiental

Yopal-Colombia

earboleda@unisangil.edu.co

Danielcastaneda@unisangil.edu.co

cpastrana@unisangil.edu.co

eyesitsalamanca@unisangil.edu.co

Resumen- Mediante la práctica del patrón de Mcfarlan se realizó las mediciones establecidas en la tabla 2. La cual tenía como objetivo determinar las absorbancias teóricas y experimentales con el fin de compararlas con la concentración de bacterias (UFC) presentes en la muestra problema (agua pectonada y bacterias).

Es importante resaltar que para tener éxito en el desarrollo de la práctica es necesario realizar medidas exactas de nuestras soluciones (Cl2Ba 1%, H2SO4 1%).

1. INTRODUCCIÓN

El patrón de McFarlad es una escala de turbidez elaborada con una mezcla que utiliza una serie de diluciones de cloruro de bario (BaCl2) y ácido sulfúrico (H2SO4) que al reaccionar  generan un precipitado de sulfato de bario (BaSO4) que produce turbidez. La turbimetría y la espectrofotometría son dos técnicas complementarias que se utilizan para el análisis cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas. Las diferencias entre los dos es que la turbidimetría mide la disminución de la luz y la espectrofotometría la compara según la radiación absorbida. Algunas leyes como la de Lambert - Beer ayudan al buen desarrollo de práctica ya que establece que la absorbancia está directamente relacionada con las propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la longitud de la trayectoria del haz de radiación al atravesar la muestra. Al igual es aplicada para representar la disminución de la radiación solar ale pasar por la atmósfera. En este caso hay una propagación de la radiación además de la absorción. Otro tema para abordar es que los contadores electrónicos permiten realizar recuentos de bacterias, levaduras no filamentosas y protozoarios, pero no de hongos y microorganismos filamentosos o miceliares.

Estos instrumentos constan básicamente de dos compartimientos comunicados a través de un pequeño conducto. En ambos compartimientos hay electrodos que miden la resistencia eléctrica del sistema, y como el orificio del conducto es muy pequeño y su resistencia es muy alta, la resistencia eléctrica de cada compartimiento es independiente.

El principio de funcionamiento de estos instrumentos es el que se explica a continuación. Un volumen fijo de una suspensión bacteriana es forzado a pasar desde un compartimiento al otro a través del pequeño conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de éste se incrementa debido a que la conductividad de la célula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y contados.

Este tipo de recuento presenta algunos inconvenientes. Ciertas bacterias muy pequeñas producen cambios en la resistencia que son comparables al "ruido" generado por la turbulencia que se desarrolla al pasar el fluido por el orificio. No pueden medirse células que formen filamentos o agregados o soluciones muy concentradas de microorganismos, debido a que el pasaje de más de una célula en un breve período de tiempo va a ser tomado como una célula más grande. Es común la obstrucción del orificio por microorganismos muy grandes.

Las bacterias son organismos procaríoticos, cuya principal característica es carecer de membrana nuclear, lo que lleva a que su material genético este disperso libremente en el citoplasma. Este hecho favorece que su reproducción, por fisión binaria, sea muy efectiva. Así, por ejemplo, en el momento de producir una infección, lo único que requiere es duplicar su material genético y dividirse en dos, por lo que rápidamente puede afectar un organismo. En el caso de los Hongos, son organismos eucarióticos, que se caracterizan por presentar una membrana nuclear. Este hecho favorece que su material genético se encuentre separado de los demás orgánelos y pueda realizar divisiones de su núcleo, necesarias para la esporulación, que es la principal forma de reproducción de este organismo. Las bacterias son todos organismos unicelulares mientras que los hongos, pueden encontrarse, en la naturaleza, en forma pluricelular (hongos filamentosos o mohos) o en forma unicelular (levaduras). Algunas bacterias presentan orgánelos como las fimbrias y flagelos que les dan movilidad. Todos los hongos son inmóviles. Las bacterias pueden ser aerobias o anaerobias, estrictas o facultativas (es decir que alternan la aerobiosis y la anaerobiosis). La mayoría de los hongos son aerobios. Otra diferencia importante de resaltar entre estos dos microorganismos, es su aspecto macroscópico y que se evidencia cuando son cultivados en el laboratorio.

Es indispensable un correcto uso de las celdas antes de introducirlas al espectrofotómetro para obtener datos exactos. A continuación enumeraremos algunas reglas:

1. Inspeccione si hay arañazos en las ventanas. Nunca toque las superficies ópticas de las celdas con sus dedos.

1. Utilizar una única celda para toda una serie de mediciones, o asegurar que todas las celdas que se utilizan tienen la misma longitud de camino, b, para transmitancias similares.

1. Al llenar las celdas, enjuáguelos a fondo con la solución a medir, y luego rellenar, asegurando que no haya burbujas de aire que se adhieran a las ventanas. Secar el exterior de la celda con etanol. Nunca use una toalla de papel.
2. Coloque las celdas dentro del instrumento con cuidado, asegurando que estén bien sentados en el compartimiento. Utilice la misma orientación de la celda cada vez que realice la medida.

1. Si se utiliza un disolvente volátil, colocar una tapa sobre la celda para reducir la evaporación.

1. Nunca almacene soluciones en las celdas. Enjuagar a fondo cuando haya terminado y dejar secar en un lugar libre de polvo. Las soluciones básicas corroen y dejan grabados en las celdas si no se limpian correctamente.

1. Siempre mantenga las celdas en soportes o cajas para cubetas cuando no están dentro del instrumento.

1. Las celdas sucias deben ser limpiadas por las caras de adentro y de afuera, Las huellas digitales en el exterior, pueden causar excesiva luz dispersa y proporcionar errores.  

1. Manejar las celdas cuidadosamente asegurándose que la mitad hacia abajo no debe tocarse.

1. Es posible usar la misma celda para analizar blanco y analizar muestra.

1. OBJETIVOS

• Establecer la cantidad de microorganismos de una muestra mediante el método turbidimétrico.

• Determinar las absorbancias teóricas y experimentales.

1. MATERIALES Y REACTIVOS

Tabla 1. MATERIALES DE LA PRÁCTICA.

1. RESULTADOS

Tabla 2. VALORES DE ABSORBANCIA EXPERIMENTAL

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