Laboratorio De Microbiologia 4. Pruebas Bioquimicas

PROGRAMA BIOLOGÍA- universidad del Quindío

Docente: Diego Fernando Marmolejo Cortes

Lina Marcela Robayo - 1094929104

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

RESUMEN

La práctica de laboratorio se llevó a cabo con diferentes tipos pruebas TSI, UREA, LIA, SIM y CITRATO, en los cuales se hizo la siembra por estría y en forma vertical. El estudio bioquímico que se lleva a cabo como complemento de otros estudios bacteriológicos es posible gracias a las reacciones fisiológicas y químicas que llevan a cabo los microorganismos. Para esto se emplean medios de cultivo enriquecidos con productos útiles para el metabolismo celular, los cuales además contienen algún indicador que hace cambiar el color del medio al efectuar dichos microorganismos sus funciones. Los organismos varían en su capacidad para utilizar diferentes compuestos carbohidratos, urea, citrato, entre otros, para algunos microorganismos que se usan en su identificación en el laboratorio .

Palabras claves: medios sólidos, medios semisólidas, siembra, enzimas.

RESULTADOS

El lugar de trabajo fue debidamente preparado con las normas microbiológicas adecuadas. Para llevar a cabo la práctica se procedió a retirar la cinta de enmascarar de la caja de Petri, que contenía las diversas colonias de bacterias.

Para realizar los tipos de siembra se tomaron cinco tubos de ensayo, cuatro de ellos que son medios sólidos como lo son UREA, LIA, CITRATO TSI; los cuales al ser agregados a dichos tubos se dejaron solidificar pero se colocaron de forma inclinada y su siembra fue por estría, mientras el medio semisólido SIM se dejó solidificar en forma vertical y su siembra se hizo con un asa bien en el centro con una profundidad de aproximadamente 2cm con el fin de observar e identificar bacterias Gram negativas, todos las siembras se dejaron 3 días para luego ser observadas.

Fig. 1, tubos de ensayo con sus medios preparados, LIA,

SIM, UREA, TSI, CITRATO

Para llevar a cabo el procedimiento mencionado anteriormente, se procedió a hacer las pruebas que a continuación se describen:

Para el agar UREA se utilizó la siguiente medida como base para la preparación del medio:

UREA

2.7 g 95 ml

X 40 ml

LIA

34 g 1000 ml

X 40 ml

TSI

65 g 1000 ml

X 40 ml

CITRATO

24,2 g 1000 ml

X 40 ml

La prueba TSI (Agar Triple Azúcar Hierro), la prueba inicial tenía una coloración roja, pero al ser sometida a una temperatura de 37° tuvo una coloración amarillo (acido), lo que se quería observar era si se lograba un desdoblamiento de carbohidratos y se puede observar claramente que el resultado fue positivo.

Fig. 2, prueba TSI, Desdoblamiento de carbohidratos, muestra

positiva por su coloración amarilla

Prueba LIA (Agar Hierro Lisina), esta prueba no mostro cambios significantes, un cambio un poco notorio es que el tono del morado es más claro que el color inicial. Esto indica que no hubo un viraje de morado a amarillo, lo cual indica que no hubo producción de enzimas descarboxilasa y de desaminosa.

Fig. 3, prueba SIM, reacción negativa sin cambios en cuanto a su cambio de color.

La prueba de Citrato Simmons, nos muestra que si hubo cambios al haber un viraje paso de verde a un verdeazulado (más azul en la parte superficial, y verde en la parte del fondo), se determina una prueba positiva, ya que este viraje de coloración indica que se utilizó al citrato como única fuente del carbono para el metabolismo.

Fig. 4, prueba CITRATO SIMMONS, prueba positiva y que hubo

cambio de coloración.

La prueba de la Urea (Agar Urea), arrojo resultados positivos, ya que hubo un viraje de coloración de amarillo a rosado, esto indica que hay microorganismos que logran desdoblar la urea, y produjo la unión de dos moléculas de amoniaco. Al no haber una producción clara de gases, podríamos incluir que un microorganismo encontrado en este medio K. pneumoniae.

Fig. 5 se observa el cambio de color de la prueba UREA, donde se evidencia

el desdoblamiento de urea por microorganismos.

La prueba Movilidad (SIM), no arrojó buenos resultados, pudo ser por no haber hecho un buen procedimiento, lo cual no indico presencia de nada y no tuvo cambio alguno .

Fig. 7, Prueba SIM, sin cambio de color ni presencia de flagelos.

DISCUSIÓN

La hidrólisis de la urea es catalizada en algunos microorganismos por una enzima específica, la ureasa, dando lugar a dos moléculas de amonio, agua y dióxido de carbono. Todo esto da lugar a un cambio en el pH, lo que causa que cambie el color original del medio (amarillo) a un color rojo bugambilia por el indicador rojo de fenol. De acuerdo a la degradación de la urea el color será más o menos intenso, (Hajna, 1945).

El agar TSI es uno de los más usados para ver la fermentación

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