Los medios de cultivos

1. ÍNDICE

2. OBJETIVOS 2

2.1 OBJETIVO GENERAL: 3

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS: 3

3. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA 3

4. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO 5

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 6

5.1 CONCLUSIONES 6

5.2 RECOMENDACIONES 6

6. BIBLIOGRAFIA 7

7. ANEXOS 7

2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL:

Identificar la utilidad de cada uno de los medios de cultivos

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Conocer los tipos de aislamiento en donde pueden crecer las bacterias, ya sea Gram positivas y Gram negativas.

 Manejar correctamente los materiales previos a la práctica y las normas de bioseguridad.

3. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA

Medios para aislamientos primarios:

Para usos generales: No selectivos, para cultivo de una amplia variedad deorganismos difíciles de hacer crecer.

A menudo están enriquecidos connmateriales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otrosfactores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre,Schaeadler, etc)

Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se añadensustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando la sustancia añadida, se varía el tipo y grado de selectividad (MacConkey, KanamicinaVancomicina).

Enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio conVitaminaK). Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales quesatisfacen requerimientos de grupos específicos de bacterias, ayudando a su identificación (Lowenstein).

Medios para identificación:

Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian laspeculiaridades fisiológicas (nutrición y respiración sobre todo) específicas delas bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a laidentificación de casi cualquier bacteria (Oxidación-Fermentación)

AGAR MAC CONKEY

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento

En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.

Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 17.0 Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

Pluripeptona 3.0

Lactosa 10.0

Mezcla de sales biliares 1.5

Cloruro de sodio 5.0

Agar 13.5

Rojo neutro 0.03

Cristal violeta 0.001

pH final: 7.1 ± 0.2

Siembra

- Sembrar en superficie.

- Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 ºC.

Incubación

Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica

Resultados

Microorganismos Colonias

Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas

Características del medio

Medio preparado: rojo púrpura

Almacenamiento:

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC.

4. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

Como primer punto

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