Necropsia y conservación de muestras histológicas

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Universidad Nacional Autónoma de México.

Departamento de Ciencias Biológicas

Sección de Bioquímica y Farmacología Humana

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Campo 1

Anatomía e Histología Humanas

Grupo: 1353

Laboratorio: L5-502

Carrera: Bioquímica Diagnóstica

Práctica No. 3  Necropsia y conservación de muestras histológicas

No. 4 procesamiento de muestras histológicas  (deshidratación, infiltración e inclusión en parafina)  

Equipo: 1

Integrantes:

Cruz Martinez Karla Minerva

Gamboa Cuevas Javier

Mendoza Briseño Nancy Giovanna

Urdapilleta López Sofía

Nombre de los profesores:

Maria Verónica Vázquez Cianca

Norma Laura Delgado Buenrostro

Elisa Pedraza  Vazquez

Fecha de realización:  1/09/2017

Fecha de entrega:   6/09/2017

Objetivo General

Realización de una necropsia de un animal de laboratorio (rata Wistar)  para identificar los órganos que integran aparatos y sistemas que lo componen, posteriormente realizar la toma de una de una muestra de un órgano a partir de la necropsia ya realizada para entender los procesos de fijación, deshidratación, aclaramiento, infiltración e inclusión.

Objetivos Particulares

• Diferenciar los órganos de diferentes especies por medio de una comparación anatómica.
• Conocer el procedimiento de una buena realización de necropsia en un animal de laboratorio.
• Entender el fundamento, características deseables y tipos de fijadores.
• Elaborar el primer paso en el procesamiento de muestras histológicas que es la preservación de tejidos con un fijador.
• entender las tecnicas histologicas

Introducción.

Eutanasia (del griego "eu" y "thanatos", que significa ‘buena muerte’)1​ es la acción u omisión que acelera la muerte de un paciente desahuciado, con su consentimiento, con la intención de evitar sufrimiento y dolor. La eutanasia está asociada al final de la vida sin sufrimiento. (Carrasco de Paula, 2004).

La eutanasia en general puede ser provocada de dos formas:

1. Método físico : disparo, aturdimiento , desnucado y otros.
2. Por sustancias químicas: Utilizándose generalmente anestésicos sobredosificados.

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Por sustancias químicas en esencial se trata de la administración de medicamentos con un fuerte efecto tranquilizante y sedante a una persona que está al borde de la muerte. Debido a que en principio existe la posibilidad de acelerar el deceso del paciente a través de una medida de este tipo, el límite entre la sedación terminal y la eutanasia es difuso y controvertido.(Freiburg, 2007).

La biopsia son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnóstico histopatológico. La biopsia entrega la máxima certeza al diagnóstico, ya que se puede observar fehacientemente el tipo de lesión celular, o daño en el tejido. Es un método de estudio directo. [pic 4]

El principal objetivo de la necropsia es realizar aquel estudio a un cadáver con la finalidad de investigar y determinar las causas de su muerte, por lo general, el término utilizado como sinónimo de autopsia, ya que en ambos casos se procede al estudios de cadáveres.
Los métodos químicos utilizan soluciones acuosas compuestas por moléculas que funcionan como fijadores que establecen puentes entre las moléculas del tejido, manteniéndolas en sus lugares originales e impidiendo su degradación.

Fijar una célula consiste en conservarla en un estado parecido posible al estado vivo. Prácticamente se trata de:

-Protegerla del ataque bacteriano.

-Evitar la autolisis de los constituyentes fundamentales de sus propias enzimas celulares; esta autolisis llegaría a provocar la transformación de las propias proteínas en aminoácidos.

-Insolubilizar los constituyentes  celulares que se pretenden estudiar

-Evitar distorsiones y retracciones

-Preparar las diversas estructuras a posteriores tratamientos, actuando como mordiente (para tinciones o impregnaciones metálicas) o para desencadenar funciones químicas (algunas reacciones histoquímicas).

La finalidad primordial de la fijación histológica o citológica es la de poner de manifiesto el sustrato morfológico y asegurar su conservación.

La primera cualidad de un buen fijador es la potencia de penetración en los tejidos, de tal manera que el tejido pueda fijar tanto las capas superficiales como las zonas profundas, también debe producir una coagulación total de las proteínas así como ser de acción rápida con el objetivo de matar lo más rápidamente las células y por ultimo no debe arrugar ni encoger los tejidos.[pic 5][pic 6]

Las soluciones químicas penetran a distintas velocidades en el interior de los tejidos; este dato nos permite determinar la dimensión de las piezas que hay que fijar, por lo que el tamaño de la pieza a fijar debe escogerse según la velocidad de la penetración del fijador empleado. El fijador empleado en laboratorio de anatomía e histología es el formol.

Formol:

-          Reductor, por lo que teóricamente tiene las mismas incompatibilidades que el alcohol; asi tenemos que, con respecto al bicromato, la reacción es tan lenta que casi no se ha iniciado cuando la fijación ya ha terminado.

-          No precipita las proteínas, pero adiciona átomos a sus moléculas

-          Fija los lípidos complejos, por lo que conserva bastante bien las mitocondrias y el aparato de Golgi.

-          No contrae las estructuras, pero si las endurece considerablemente.

Las piezas fijadas antes de proceder a cortarlas deben ser incluidas en un medio plástico, salvo algunas excepciones.  Este medio de inclusión debe ser lo más químicamente neutro posible.

El principio de la técnica de la inclusión consiste en someter las piezas a la acción de disolventes para conseguir que una sustancia frecuentemente  hidrófoba penetre en un tejido que en principio está hidratado, para mantener en su posición original los elementos que lo integran al efectuar los cortes. Por lo que la pieza debe someterse a una serie  de tratamientos sucesivos, cada uno de los cuales está destinado a preparar la penetración del siguiente y en eliminar el anterior. Cada disolvente, por tanto debe ser miscible con el que ha precedido y con el que le sigue.

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