PRÁCTICA 2 “SALADO” ( SALTING OUT) DE PROTEINAS,

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Universidad de Oriente

Núcleo Bolívar

Escuela de Cs. de la Salud “DR. FRANCISCO BATTISTINI CASALTA”

Departamento de Cs. Fisiológicas

Asignatura: Bioquímica

PRÁCTICA 2 “SALADO” ( SALTING OUT) DE PROTEINAS,

SU APLICACIÓN EN LA SEPARACION Y DETERMINACION

DE ALBÚMINA Y GLOBULINASEN PLASMAS SANGUÍNEO.

Profesor:                                                                  Bachilleres:

Licdo. Rafael González                                                         Camacho, Eva  C.I. 26.073.624

                                                                                    Gerome, Emiy C.I.25.084.322

                                                                              Gil, Julia C.I.22.621.395

León, Mailuz C.I.25.612.336

Meneses, Maria C.I.26.225.298

 Salazar, Oriana C.I.25.493.326

               Troncone, Caslos C.I.25.036.527

Ciudad Bolívar, 04 de Julio del 2016.

Introducción

El suero sanguíneo o suero hepático es el componente de la sangre, resultante tras permitir la coagulación de esta y eliminar el coagulo resultante. Es equivalente al plasma sanguíneo pero sin las proteínas involucradas en la coagulación. La albumina es una proteína que se encuentra en gran proporción en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre, y una de las más abundantes en el ser humano, es sintetizada en el hígado, tiene carga eléctrica negativa, la membrana basal del glomérulo renal, también esta cargada negativamente lo que impide la filtración glomerular de la albumina a la orina. La concentración normal en la sangre oscila entre 3,5 y 5,0 gramos por decilitro, y supone un 54,31 % de la proteína plasmática el resto de las proteínas presentes en n el plasma se llaman en conjunto globulinas.

Las proteínas existen en una gran variedad, no existe un modelo de clasificación aceptado del todo, por lo cual se ha buscado organizarles de acuerdo a su solubilidad, la forma, la estructura tridimensional que presenta y su función en el organismo. Tomando en cuenta la solubilidad de algunas proteínas en soluciones salinas acuosas, en la bioquímica clínica pueden ser clasificadas de manera algo limitada en albuminas, globulinas, histonas, entre otras. Las sales neutras ejercen efecto pronunciados sobre la solubilidad de las proteínas globulares. A baja concentración, las sales incrementan la solubilidad de muchas proteínas, fenómenos que reciben el nombre de solubilizacion por salado. La capacidad de las sales neutras para influir en la solubilidad de las proteínas está en función de su fuerza iónica, constituyen una medida tanto de concentración como el número de cargas eléctricas existentes en los cationes y en los aniones aportados por la sal.

El efecto de solubilidad por salado está causado por cambios en la tendencia de ionización, de los grupos R disociables de la proteína.

El reactivo de Biuret, cuantifica las proteínas se compone de: hidróxido potasio (KOH) y sulfato de cobre (CUSO4); que genera una reacción de color violeta, debido a la coordinación de iones cúpricos con pareja de electrones no apareados de los átomos de nitrógeno proteico y átomos de oxigeno del agua. El sulfato de sodio es una sustancia incolora cristalina son buena solubilidad en agua y mala solubilidad en la mayoría de los solventes orgánicos, con excepción de glicerina. Las globulinas son precipitadas con soluciones saturadas de sulfato de sodio. Los valores normales serian de 24-27 (mEq/L).

Uno de los reactivos a usar es el Cloruro de sodio, que es un compuesto químico con la forma NaCI. El sodio es el principal catión extracelular y actúa en el control de distribución de agua, balance electrolítico y presión homeostática de los fluidos corporales. El sodio también se asocia al cloruro y bicarbonato en la regulación de balance acido-base. El cloruro es el principal anión extracelular, sigue la disposición fisiológica de sodio y los cambios en el balance acido-base del organismo son reflejados por cambios de la concentración sérica de cloruro. Valores normales de cloruro de sodio en el organismo: es de 135 a 145 mili equivalente por litro (mEq/L).

El éter etílico sulfúrico, es un éter etílico incoloro, muy inflamable, con un abajo punto de ebullición de sabor acre y ardiente, es más ligero que el agua su densidad es de 736 kg), es un buen disolvente de las grasas, azufre, fosforo, entre otros. Tiene aplicaciones industriales como disolventes y en fábricas como explosivo, se ha propuesto que la enzima citocromo p450 es la que metaboliza el dietil éter.  También inhibe el metabolismo de otras drogas requiriendo un metabolismo oxidativo.

 La curva de calibración es una representación gráfica utilizada para determinar la concentración de diversas sustancias en solución. En esta práctica la utilizaremos para determinar la cantidad de proteínas totales en la solución.

A) Cuantificación de proteínas

-Cálculos de la cantidad de proteínas presente en cada patrón:

1)   8mg de patrón de proteínas___________ 1ml

               X mg    ___________________    0,25ml

                                 X= 2 mg de proteínas

2)  8mg de patrón de proteínas ___________ 1ml

               X mg       ___________________ 0,50ml

                                  X= 4 mg de proteínas  

3) 8mg de patrón de proteínas_____________ 1ml

                X mg   _______________________ 0,75ml

                                   X= 6 mg de proteínas

4) 8mg de patrón de proteínas______________ 1ml

                 X mg  ________________________ 1ml

                                    X= 8mg de proteínas

Tabla 1: Valores obtenidos en la determinación de proteínas totales por el método de Biuret.

-Cálculo de la cantidad de proteínas totales presentes en la muestra de suero:

Si en 0,1 ml de suero ______________ 17 mg de proteínas totales

En 100 ml de suero   ________________                   X

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