Químico Farmacéutico Biólogo

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE GUERRERO[pic 1][pic 2][pic 3]

Unidad Académica de Ciencias Naturales

Químico Farmacéutico Biólogo

Virología

Práctica 2

Determinación del antígeno de hepatitis B

M. C Sandra Quintana Ponce

Integrantes

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501 QFB

Chilpancingo de los Bravos, Gro. a 14 de Octubre del 2015

Determinación de antígeno de hepatitis B

Objetivo

Determinar en el suero si se encuentra el antígeno de superficie de hepatitis B  (HBsAg)

Fundamento

El virus de la hepatitis B (HBV) pertenece a una nueva familia de virus de ADN llamado hepadnaviridae. Si se caracteriza  por un mercado he atropismo y un singular medio de replicación a través de un mecanismo de transcripción inversa. El virón completo o partícula dane consiste en una molécula  de ADN  circular protegida por un antígeno  nucleocaspide/nuclear (HBcAg) y rodeadas por un envoltorio de lipoproteína conocido  como antígeno de superficie (HBsAg) el HBsAg también se encuentra en la sangre en forma de partículas incompletas esféricas o filamentosas no infecciosas . Un componente menor del núcleo capside HBV el antígeno HBe (HBeAg) también puede detectarse en la sangre durante la fase replicativa del virus

El virus de la hepatitis B es un virón ubicuo de distribución global. Las principales rutas  de transmisión viral son horizontales a través de la contaminación sexual y parental y vertical, a través de la transmisión prenatal de la madre infectada al feto

Las consecuencias clínicas  de la infección de HBV  varían entre las totalmente inaparentes (70% de los casos) ala hepatitis ictérica aguda  la mayoría de los pacientes se recuperan  completamente a los seis meses después del comienzo de la enfermedad

Los portadores crónicos de hepatitis B (200Millones en todo el mundo ) constituyen la principal reserva  del virus y contribuyen a la diseminación  de la enfermedad

Materiales y métodos

• Pipetas de precisión ajustables con punta desechable con capacidad de 100 y 20 µ[pic 5]
• Cronometro
• Tubos anticoagulantes
• Papel estraza
• Gradilla
• Jeringas
• Control positivo y negativo
• Peines

Método Elisa:  La técnica Elisa es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpoenlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometría el antígeno en la muestra.

Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular está presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran número de variables, tales como selección de reactivo, temperatura, medición de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente, puede afectar los pasos sucesivos y el resultado de la prueba.

Procedimiento

1.- Pre incubación de la bandeja de desarrollo: 45 minutos a 37°

2.-Tomar las muestras y controles.

3.- Agregar muestras y controles a las fila A. Agregar diluyente para muestras. Mezclar.

4.- Sacar el peine del empaque

5.- Insertar el peine y mezclar en la fila A. Incubar a 37°.

6.- Perforar la fila B

7.- Absorber el líquido adherido a los dientes.

8.- Inserta el peine y agitar en la fila B. Incubar.

9.- Reacción de color en la fila F.

10.- Resultados.

Desarrollo

1.- Incube la bandeja de desarrollo en una incubadora a 37 grados durante 45 minutos. Lleve todos los otros  componentes (peines, controles y muestras) a temperatura ambiente

2.- Cubra la mesa de trabajo con papel absorbente, a ser desechado como material bio contaminante  al concluir la prueba

3.- Mezcle los reactivos sacudiendo la bandeja de desarrollo

Nota: No retire la cubierta  de aluminio de la bandeja de desarrolló rómpala usando la punta desechable de la pipeta o el perforador solo cuando las instrucciones de la prueba así lo indiquen  

PREPARACIÓN DEL PEINE

Precaución: para asegurar el fundamento apropiado de la prueba, no toque los dientes del peine  

1.- abra el empaque de aluminio por el borde perforado. Retire el peine

2.- es posible utilizar todo el peine y la bandeja de desarrollo solamente una parte. Para utilizar parte del peine

1. Determine cuantos dientes va a necesitar para analizar  las muestras y los controles. Se necesita un diente para cada prueba  cada diente tiene impreso el número de código del kit, “51” para permitir la identificación de los dientes sueltos.
2. Doble y rompa verticalmente el peine, o córtelo con tijeras para separar el     numero requerido para las pruebas (Nro. de pruebas más 2 controles)  

Realice las incubaciones a 37 grados los lavados deben ser realizados a temperatura ambiente (22·c-26·c)

·captura del antígeno (fila A de la bandeja de desarrollo)

1.- Tome µ  de la muestra con la pipeta perfore la cubierta de papel aluminio en un pocillo de la fila A de la bandeja  de desarrollo con la punta de la pipeta o el  perforador y vierta la muestra en el fondo del pocillo .Agregue a este pocillo 20µ de diluyente  para muestras y mezcle vaciando y rellenando repetidamente la solución con la pipeta deseche la punta con la pipeta

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