TP2: Extracción Y Cuantificación De Proteínas

Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula, ellas constituyen

más del 50% del peso seco de la célula. Cada tipo celular, tiene un rol específico determinado por

su composición proteica. Con la posibilidad de que 20 (o 22) aminoácidos diferentes puedan estar

unidos en cualquier orden para conformar polipéptidos de cientos de aminoácidos, tienen el

extraordinario potencial de producir una gran cantidad de variantes en su conformación. Esta

variedad genera funciones tan refinadas como las de las enzimas que están involucradas en el

metabolismo celular. Una bacteria puede tener cerca de 1000 proteínas diferentes, en una célula

humana puede haber más de 10.000 clases de proteínas distintas.

La composición protéica de las células en un determinado momento depende del conjunto

de genes que se estén activando y esto está relacionado directamente con las señales que recibe

la célula, de su micro ambiente y de las características celulares que le son propias. Es decir que

el patrón proteico de una célula vegetal será distinto al de una célula animal, una célula hepática

de un ratón, será distinta de una célula hepática de un humano, y a su vez una célula hepática de

ratón será distinta a una neurona del mismo animal

La expresión de proteínas puede estudiarse por ejemplo, mediante una electroforesis en

gel de poliacrilamida (TP Nº3). Para esto es necesario extraer primero las proteínas a partir de las

células que constituyen los tejidos u órganos.

Al momento de elegir el protocolo a seguir para obtener el extracto crudo, es importante

tener en cuenta tanto el material de partida como su posterior utilización:

Material biologico de partida-tipo de organismo: En el caso de órganos u otros tejidos

animales, es necesario disgregarlos antes de proceder a la lisis celular, ya que las células se

encuentran rodeadas de tejido conectivo. En general estas técnicas involucran la utilización de

enzimas (como por ejemplo colagenasa) y/o una ruptura mecánica grosera. Para esto pueden

utilizarse morteros, homogeneizadores eléctricos, tijeras o tamices metálicos (mesh), entre otros.

Cuando el material es un cultivo celular, la extracción puede realizarse adicionando un

detergente, realizando un shock osmótico, o por sonicación.

Finalidad del extracto proteico: esto determinará el buffer de extracción que se utilizará

dependiendo se desea o no que las proteínas conserven su actividad biológica, su conformación

nativa, su interacción con otras proteínas u otras moléculas. Algunos protocolos son tan violentos

que involucran la ruptura de todas las membranas; otros en cambio permiten fraccionar y obtener,

distintos componentes subcelulares

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