PRUEBAS PARA LA PRESENCIA DE BACTERIAS SULFATO-REDUCTORAS

PRUEBAS PARA LA PRESENCIA DE BACTERIAS SULFATO-REDUCTORAS

La experiencia con las pruebas en el campo de agua de enfriamiento y aceite han mostrado los métodos comunes para las pruebas de bacterias sulfato reductoras (BSR) pueden producir resultados engañosos.

Varios métodos de prueba son discutidos y las ventajas y limitaciones de cada uno son examinadas estos métodos incluyen caldo de botellas, caldo de agar, tubos de agar licuados, un método específico para anticuerpos (superficie celular) y una técnica de anticuerpo específico para el desarrollo que pone a prueba un enzima para las BSR. Esos resultados muestran que no todos los métodos son precisos y la limitación de algún método tiene que ser reconsiderado para obtener un resultado significativo.

MÉTODOS DE PRUEBA

Este estudio examina seis métodos de prueba. Tres de los métodos de cultivo son botellas de caldo, profundidades de agar y tubos de agar licuados. Los demás ensayo ATP, epifluorescentes/anticuerpo de la superficie celular y APS anticuerpos reductasa, implican la detención directa de las BSR .

Inicialmente, en el estudio se empleó el recuento de placa como árbitro de métodos de cultivo. En la práctica, sin embargo, el chapado anaeróbico resulta ser más fiable que los métodos que se tenían intención de arbitrar. En estos métodos crecieron sólo unas pocas cepas de BSR y era poco fiable para otras cepas. Por lo tanto, fue eliminado del estudio.

MÉTODOS DE CULTIVO

Investigaciones han desarrollado un sinnúmero de medios de cultivo para su uso en casos particulares. El medio de caldo API RP- 38 fue elegido porque es el método de cultivo más ampliamente utilizado, dos métodos de agar también se incluyeron porque ofrecen más corto el tiempo de prueba, todos los cultivos en este estudio se incubaron a 350° C

• API RP-38 Caldo de botellas

Desarrollado por el Instituto Americano del Petróleo y se describe en la práctica recomendada No. 38 (Técnica alternativa para estimar las BSR, bacterias sulfato reductoras).

Este método utiliza un medio sobre la base de lactato. Cuando las BSR están presente en las muestras, ellas reducen el sulfato a un medio sulfuro. Al reaccionar con hierro en la solución produce sulfuro ferroso (La señal de presencia de BSR dura 28 días). El procedimiento exacto fue seguido tal cual fue enunciado en RP-38. En pocas palabras, consiste en inyectar 1 mL de la muestra a un bote de 9 mL de líquido, el bote es agitado y luego con una jeringa se extrae 1 mL de la prueba, y se inyecta en un nuevo bote.

Este procedimiento se repite para producir un mayor número de disoluciones según sean necesarias (RP-38 especifica una serie de 5 botellas, pero en ocasiones puede ser necesario 10 a 12 botellas cuando la cantidad es muy alta).

Se supone que solo una vez crece la bacteria que es necesaria para denigrar una botella. La interpretación más simple de los resultados de las pruebas, entonces, es a considerar que si una botella es oscurecida la muestra contiene mínimo un organismo, si dos botellas son oscurecidas, la muestra contiene al menos 10 organismos: si 3 botellas son oscurecidas, las muestras contienen 100 organismos; y asi sucesivamente.

Los resultados son usualmente reportados, por lo tanto, como una gama amplia, por ejemplo: 4 botellas oscurecidas deberían interpretarse como 103-104 células entre mL en la muestra original. Cuando el aparece el símbolo “ ”, significa que todas las botellas en una serie se volvieron negras. Por ejemplo, si 6 botellas fueron inoculadas y todas las 6 se volvieron oscuras, el resultado debería reportarse como el símbolo “ ” 105-106.

En los casos donde se duplica el conjunto de botellas, difiere por uno en el número de botellas oscurecidas. El valor único se informa en ambos casos. Por ejemplo si un conjunto de tres botellas se volvieron negras y en un duplicado, cuatro se volvieron negras, los números que interfieren son 102-103 en un caso y 103-104 en el otro. Por simplicidad, solo el valor único (103 es reportado).

En ocasiones, una botella del conjunto seguirá siendo clara, mientras que las botellas de mayo e inferior diluciones serán oscuras. Cuando sucedió esto, los resultados fueron interpretados como si la botella transparente s hubiese convertido en oscura, es decir, la última botella de la serie que se volvió oscura determina los resultados de la prueba.

• Caldo de Agar

La segunda técnica de evaluación de cultivo es el caldo de agar desarrollado por Biosan Laboratorios. El medio que se describe en el apéndice es una modificación escasa del medio RP-38.

Sin embargo el sulfato de sodio es incluido como un agente oxidante reductor, Al igual que con las botellas RP-38, el ennegrecimiento del medio es la prueba positiva para las SRB.

El número relativo de Bacterias se estiman en este caso observando la rapidez con que se produce el ennegrecimiento. El medio se inocula por inmersión de un limpiador de tuberías, en la muestra sin diluir e insertándolo en un único vial de agar semi-sólido.

A continuación se añade aceite mineral y una tableta de generación de Co2 para excluir el aire y se tape el vial, Se encuba durante un máximo de cinco días y se comprueba diariamente para el ennegrecimiento.

• Tubos de Agar Licuado

Este método fue desarrollado por Nalco Chemical Co. Utilizo como único nutriente Tiptona. En las profundidades del agar contiene sulfito de sodio como un eliminador de oxígeno.

El procedimiento del ensayo implica la colocación de los tubos en agua hirviendo, se licua el medio y luego se enfrían los tubos hasta que alcancen una temperatura de 40 a 45° C antes de añadir de la muestra. Se pueden hacer nuevas diluciones hasta 106. Estas diluciones se pipetearon hasta el fondo del tubo posteriormente los tubos se taparon herméticamente y se incubaron durante tres días.

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