PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DE BACTERIAS: KLEBSIELLA

PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DE BACTERIAS: KLEBSIELLA

Aldana Martínez Laura, Machado Toloza Luisa, IbañezEusse Andrés

Universidad del Magdalena, Facultad de Ingeniería Ambiental y Sanitaria

Lauryaldana_10@hotmail.com, chicapiscis_95@hotmail.com ,andresiecr@hotmail.com,

Santa Marta D.T.C.H, Magdalena, Colombia.

RESUMEN: Las pruebas bioquímicas han permitido reconocer características fundamentales que conllevan a identificar y clasificar  taxonómicamente los distintos microorganismos, por esta razón  en el laboratorio se realizaron unas serie de pruebas; utilizadas especialmente en esta práctica: la prueba de la catalasa, coagulasa, oxidasa, fermentación de azucares, citrato, Indol, Urea, rojo de metilo, y vogesproskauer; las cuales arrojaron resultados característicos que permitieron descifrar el microorganismo en estudio: la klebsiella.

ABSTRACT: Biochemical tests have allowed us to recognize key features that lead to identify and classify taxonomically different microorganisms, for this reason in the laboratory were conducted a series of tests, used especially in this practice: catalase test, coagulase, oxidase, fermentation of sugars, citrate, indole, Urea, methyl red, and VogesProskauer; characteristic which gave results that allow the microorganism to decipher study: klebsiella.

INTRODUCCION:

En el año 1676 Antoine Van Leeuwenhoek observo a través de un microscopio de una sola lentepequeños seres vivos que denomino  “animálculos”, microorganismos.

Los microorganismos son seres vivos muy diminutos que individualmente suelen ser demasiado pequeños para ser observados a simple vista, el grupo incluye las bacterias, los hongos, los protozoos y las algas microscópicas. También incluye los virus, entidades no celulares que a veces se consideran en el límite entre lo vivo y lo inerte(Tortora, Funke, Case, 2007).

A lo largo del tiempo la microbiología ha evolucionado y ha dado lugar a numerosas técnicas que han permitido el estudio de los microorganismos, obtener muestras de estos, multiplicarlos y aislarlos en cultivos puros, identificarlos, y observar su morfología y metabolismo.

Al obtener un medio de cultivo puro es fundamental aplicar el procedimiento de identificación de bacterias mediante técnicas de laboratorios conocidas como pruebas bioquímicas, las cuales se utilizan con frecuencia para identificar bacterias y levaduras porque las distintas especies producen diferentes enzimas. Estas pruebas tienen por finalidad detectar la presencia de enzimas (Tortora, funke, case 2007).

Entre las pruebas bioquímicas más utilizadas están (Lippincott&Wilkins, 2003):

• Prueba de la catalasa:El H2O2 si se acumula, es tóxico para las bacterias y produce su muerte. La catalasa puede descomponer el  H2O2 liberando oxígeno. Esta prueba permite detectar la presencia de la enzima de la catalasa en las bacterias.
• Prueba de la coagulasa: Laestafilocoagulasa (coagulasa) es producida por S. aureus. La coagulasa aumenta la velocidad de coagulación del plasma. Esta prueba se realiza para indicar la virulencia o patogenicidad de este microorganismo.
• Prueba de la oxidasa: Se basa en la producción bacteriana de una enzima oxidasa intracelular. Esta reacción oxidasa se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidación del citocromo reducido por el oxigeno molecular.  Esta prueba determina la presencia de la enzima oxidasa.
• Prueba de fermentación de azucares:  Se determina la capacidad de un microorganismo para fermentar azucares (glucosa, lactosa, sacarosa).
• Prueba del citrato: La energía puede ser proporcionada a algunas bacterias en ausencia de fermentación o producción de ácido láctico por la utilización del citrato como única fuente de carbono. En esta prueba se determina si un microorganismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono para el metabolismo.
• Prueba del Indol: Determina la habilidad del organismo de degradar el aminoácido triptófano liberando Indol.
• Prueba de la Ureasa: Permite determinar si el microorganismo presenta la enzima ureasa que hidroliza la urea en dos moléculas de amoniaco.
• Prueba del Rojo de Metilo: El rojo de metilo como indicador de ph permite determinar la producción de ácidos orgánicos producidos durante la fermentación de carbohidratos.
• Prueba del VogesProskauer: Permite identificar si la bacteria realizo una fermentación acido-mixta que conlleva a la fermentación de carbohidratos a alcohol.

MATERIALES Y METODOS:

Para realizar la identificación de la bacteria se  realizan varias  pruebas bioquímicas. llevando a cabo en primera instancia la prueba de la catalasa, para esta prueba se tomo un portaobjeto en el cual se agrego peróxido de hidrogeno () al 3% , luego con ayuda de un palillo se coge una pequeña cantidad del cultivo se froto en el peróxido de hidrogeno comprobando si es Streptococos o Staphylococoscon la formación de burbujas mostrando si es positiva o negativa.[pic 1]

Al instante realizamos la prueba de la oxidasa en esta algunos citocromos actúan como el último eslabón en la cadena respiratoria aerobia al transferir electrones al oxígeno, con formación de agua, se observa mediante un reactivo indicador como para-amino-dimetilamina ,ayudando a diferenciar bacterias como   Enterobacteriaceae y Pseudomonaceae; En esta prueba se toma un inoculo del cultivo con ayuda del palillo para luego frotarla sobre el papel oxidasa, esperando un viraje del color que nos dirá si es negativa o positiva.

Continuando con la prueba de fermentación de azucares la primera que realizamos fue la TSI. En la cual se tomó un agar inclinado y se hizo una siembra por picadura y superficial para poder observar si la bacteria es móvil o inmóvil, y la producción de sulfuro por acción enzimática de los aminoácidos mostrando una coloración negra. El agar está constituido por lactosa 70%, sacarosa y glucosa 30%, lo que indica que al fermentarse nos mostrara una coloración característica de cada azúcar, la lactosa muestra un color amarillo en el fondo y la superficie, la sacarosa color amarillo en la línea y en el fondo y la glucosa color amarillo en el fondo y en la superficie roja; en esta prueba el indicador de PH es el rojo de fenol; se suma la realización de la fermentación de tres azucares , glucosa, xilosa y fructosa ,en estas se mide la fermentación por la producción de gas en la campana durham y un viraje de color amarillo q indica producción de acido todo se observa después de incubar 24 horas.

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