Cromatografía Líquida: HPLC y UPLC
Enviado por Laura212223 • 12 de Febrero de 2023 • Informe • 1.351 Palabras (6 Páginas) • 165 Visitas
Cromatografía Líquida: HPLC y UPLC | Item | Puntuación | |
Formato | 0,5 | ||
Resumen | 0,5 | ||
Metodología | 0,5 | ||
Esquema | 0,5 | ||
Resultados | 3,0 | ||
Conclusiones | 1,0 | ||
Total | |||
C. Chavez1, R. Nuñez1, L. Palacios1, M. Ramírez1, L. Zambrano1 (1) Escuela Politécnica Nacional, Quito, Ecuador, laura.palacios@epn.edu.ec | |||
Resumen: En términos generales, la técnica analítica HPLC es un procedimiento que realiza una separación de componentes de una muestra que se encuentra en solución con base en la interacción de la fase móvil, la muestra y la columna. Esta última es la parte más importante de este método pues en ella se realizó la separación por afinidad. La columna utilizada fue C18 y el método empleado fue por fase reversa, que consiste en el uso de una fase móvil polar (agua y metanol en proporción 30/70) y una fase estacionaria (columna) hidrofóbica no polar. En el procedimiento se inyectó una muestra de fenol de 10 ppm previamente filtrada con una jeringa con un filtro de tamaño de poro 0,45 μm. Se utilizó un detector de fluorescencia donde la longitud de onda de los fenoles fue de 270 nm, con estos datos el equipo generó un cromatograma donde se relacionó el tiempo de retención y la absorbancia. Por otro lado, se observó que la técnica utilizada con UPLC se destaca por la implementación de una bomba cuaternaria (donde se ubican 4 tipos de solventes para la fase móvil) con una capacidad de 96 muestras. |
Metodología y esquema
Se realizó una clase demostrativa sobre cromatografía liquida, para ello se expusieron dos técnicas: Cromatografía Liquida de Alta Resolución (HPLC) y Cromatografía liquida de ultra alta resolución (UPLC).
Para la técnica de HPLC se utilizó el equipo Agilent Technology HPLC del cual se puede mencionar las siguientes características:
Sus detectores de diodos le proveen de mayor sensibilidad en el espectro de 190 a 950 nm. El investigador tiene la posibilidad de ingresar información al equipo para una detección selectiva de masas. Además, este equipo usa un sistema HPLC-Chip/MS que le proporciona la capacidad de una alta sensibilidad para muestras pequeñas [1].
Sus inyectores automáticos dan un nivel de precisión de menor a 0.5 % RSD que corresponde a la desviación estándar relativa, que da a conocer la dispersión de una serie de datos con relación a su media [2].
Este equipo cuenta con un sistema de cromatografía líquida (LC) rápido al ultrarrápido que le permite procesar en menor tiempo más muestras. Cuenta con una bomba binaria que puede trabajar con dos solventes en las proporciones que el analista desee [3].
Con un sencillo mantenimiento y una monitorización de parámetros importantes permite una mayor productividad con bajos costos operativos [4].
En general, en un sistema de cromatografía HPLC el interior de la columna, conocido como fase estacionaria, está constituido por un relleno el cual captura selectivamente los diferentes componentes de la muestra. El resultado de la separación de los componentes de la mezcla va a depender de la interacción entre las fases estacionaria y móvil, dando así el cromatograma esperado el cual permite la determinación cualitativa y cuantitativa de los diversos componentes de la muestra [5].
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Figura 1. Esquema del equipo Agilent Technologies HPLC*
Para la técnica de UPLC se mostró el equipo Acquity de Waters el cual tiene las siguientes características: Bomba cuaternaria que permite usar cuatro solventes para la fase móvil, capacidad de almacenamiento de 96 muestras y cuenta con dos tipos de detectores: fluorescencia y un arreglo de diodos.
Este equipo puede trabajar con volúmenes de inyección que varían entre 0,1 μL y 1 mL. Esto es posible por el uso de programas y métodos que facilitan la compatibilidad con espectrómetros de masas muy sensibles [6].
Puede controlar la temperatura en las columnas debido a su posibilidad de configuración con un intervalo de temperatura de 4ºC a 90 ºC.
Cuenta con un sistema ACQUITY UPLC H-Class PLUS con una gran variedad de detectores que le permiten obtener un verdadero análisis y rendimiento UPLC [7].
Usa la tecnología Auto-Blend Plus que le permite formular, ejecutar y facilitar el desarrollo de métodos y sus pruebas de robustez, incluso detectar cambios muy pequeños en el pH y la fuerza iónica de las fases móviles a partir de eluyentes puros o soluciones madre [8].
[pic 2]
Figura 2. Esquema del equipo UPLC
Resultados y discusión
La técnica de cromatografía liquida usada en esta práctica tiene una variedad de aplicaciones, debido a que permite el análisis y cuantificación de los componentes de una mezcla de sustancias químicas, ya sea en el campo de la bioquímica, productos farmacéuticos, investigación alimentaria, contaminantes medioambientales, entre otros. Por ejemplo, el equipo HPLC se lo puede utilizar para detectar sustancias ilícitas en los atletas [9].
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