Descripción de las enzimas de restricción de tipo 2 y 3

1. Describa las enzimas de restricción de tipo 2 y 3

Son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del material genético a partir de una secuencia que reconocen. Permiten cortar DNA de hebra doble, donde reconocen secuencias palindrómicas

Tipo 1

Una sola enzima que posee 3 subunidades reconoce el sitio de ADN .Esta enzima metila y restringe. La restricción no ocurre en el sitio de reconocimiento, sino que es al azar y en sitios distantes al de reconocimiento.

Tipo II:

Sólo tienen actividad de restricción.

Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que reconocen.

Sólo requieren Mg++ como cofactor.

No necesitan ATP.

2. A partir de cuales organismos se aíslan las enzimas de restricción, ejemplos

Las enzimas de restricción se aíslan a partir de las bacterias, ya que en 1970 se descubrió que las bacterias tienen un sistema de defensa para eliminar el ADN extraño que las infectaba, estas eran unas enzimas que cortaban el ADN (enzimas de restricción) en unos puntos concretos de la secuencia.

Ejemplos:

Bacteria: Haemophilus aegytius HaeIII

Bacteria: Thermus aquaticus Taq I

Bacteria: Haemophilus hamolytica Hha I

Bacteria: Desulfovibrio desulfuricans Dde I

Bacteria: Moraxella bovis Mbo II

Bacteria: Escherichia coli Eco RV y Eco R

3. Definir que es una secuencia palindrómicas

Secuencias que se leen igual en ambas direcciones

4. Que son los cortes pegajosos o cohesivos 5’ y 3’. mencione una enzima que genere este tipo de cortes

Los fragmentos de restricción de doble cadena resultantes tienen por lo menos un extremo monocatenario, denominado extremo cohesivo o pegajoso. Estas regiones cortas pueden unirse con los extremos cohesivos complementarios en otras moléculas de DNA cortadas por la misma enzima a través de enlaces de hidrógeno y la enzima que genera estos cortes es ecor1

5. Mencione un ejemplo de enzima que genere extremos o terminales lisas o abruptas

AATATT ejemplo

TTATAA

SspI (enzima)

6. Escriba la secuencia de DNA que reconoce la enzima sma 1

Cortan el DNA formando fragmentos romos. Fragmentos de DNA con extremos romos también pueden unirse y formar moléculas recombinantes, pero primer deben modificarse, la enzima desoxinucleotidil transferasa terminal se utiliza para generar extremos de cadena sencilla mediante la adición de colas de nucleótidos. Si uno de los DNA se le añade una cola de poli d A al otro DNA se le añade una cola de poli –DT, se forman colas complementarias, y los fragmentos pueden unirse mediante puentes de hidrogeno, entonces por ligación pueden formarse moléculas recombinantes.

Secuencia que reconoce la enzima sma 1: GGGCCC

7. Proponga un esquema para clonar el gen de lactato deshidrogenasa que es una enzima que aumenta durante el ejercicio.

El proceso para clonar el gen de lactato deshidrogenasa es el siguiente:

Uno de los pasos iniciales es aplicar la técnica de rt-PCR para obtener el

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