Determinacion de hemoglobina

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA

• OBJETIVOS

• Determinar la concentración de hemoglobina en sangre total.
• Explicar la importancia de la hemoglobina para el organismo.

• INTRODUCCION

La hemoglobina es una heteroproteína de la sangre, de masa molecular 64 kDa, de color rojo característico, que transporta el oxígeno desde los órganos respiratorios hasta los tejidos, el dióxido de carbono desde los tejidos hasta los pulmones que lo eliminan y también participa en la regulación de pH de la sangre en vertebrados. La hemoglobina es una proteína de estructura cuaternaria, su función principal es el transporte de oxígeno. Esta proteína hace parte de la familia de las hemoproteínas, ya que posee un grupo hem.

La hemoglobina es una proteína tetrámera, que consiste de cuatro cadenas polipeptídicas con estructuras primarias diferentes. La hemoglobina presente en los adultos (HbA) tiene dos cadenas α y dos cadenas β. La cadena α consiste de 141 aminoácidos y una secuencia específica, mientras que la cadena β consiste de 146 aminoácidos con una estructura primaria diferente. Estas cadenas son codificadas por genes diferentes y tienen estructuras primarias diferentes. En el caso de las cadenas δ y γ de otros tipos de hemoglobina humana, como la hemoglobina fetal (HbF) es muy similar a la cadena β. La estructura tetrámera de los tipos comunes de hemoglobina humana son las siguientes: HbA1 tiene α2β2, HbF tiene α2γ2 y HbA2 (tipo menos común en los adultos) tiene α2δ2. Las cadenas α y β de la hemoglobina tienen un 75% de hélices alfa como estructura secundaria, con 7 y 8 segmentos respectivamente. Cada cadena polipeptídica de la hemoglobina está unida a un grupo hem para formar una subunidad. Las cuatro subunidades de la hemoglobina en su estructura cuaternaria forman un tetraedro. Y sus subunidades se unen entre ellas por puentes de sal, que estabilizan su estructura.

El grupo hem está localizado en un hoyuelo entre dos hélices de la cadena de la globina y a su vez está protegido por un residuo de valina. Los grupos vinilos no polares del grupo hem se encuentran en el interior hidrofóbico del hoyuelo, mientras que los grupos profirina polares cargados se encuentran orientados hacia la superficie hidrofílica de la subunidad. También se encuentran residuos de histidina de las cadenas polipeptídicas, que se enlazan al átomo de hierro y se designan como histidinas proximales, ya que están presentes cerca al grupo hem. Mientras que la histidina distal se encuentra lejos del grupo hem. El átomo de hierro se encuentra en el centro del anillo de profirina y tiene seis valencias. El hierro está unido al nitrógeno de los cuatro anillos de pirrol por cuatro de sus valencias, su quinta valencia se une al nitrógeno de la histidina proximal y la sexta está ocupada por la histidina distal o por oxígeno.

• FUNDAMENTOS DEL METODO

El método está basado en la determinación de cianometahemoglobina aceptada como método estándar. La hemoglobina de la muestra de sangre total es liberada de los eritrocitos y oxidada a hexociano ferrato de potasio formando metahemoglobina. Esta reacciona con el cianuro formando cianometahemoglobina estable cuya absorbancia a 540 nm es directamente proporcional a la concentración de hemoglobina de la muestra.

• REACTIVOS PROVISTOS

Reactivo de trabajo. Preparar alícuotas de acuerdo a la cantidad de muestras a trabajar. Almacenar en un frasco o recipiente oscuro y etiquetar cuidadosamente

• PROCEDIMIENTO

En un tubo de ensayo  colocar:

Enjuagar la micro pipeta varias veces, mezclar bien y leer la absorbancia a 540 nm después de tres minutos frente al blanco de reactivo (ΔA). El color del complejo es estable por dos horas.

Para calcular la concentración de hemoglobina, multiplicar ΔA x 36,8 g/dL

• VALORES NORMALES

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

• RESULTADOS

LECTURA: 0,392

FACTOR: 36,8

                        Hb= 0,392 X 36,8

                        Hb= 14,43 g/dL

• DISCUSION

Se realizó este examen de hemoglobina para ver si mi compañera se encuentra en los valores normales y obtuvimos el 14,43 g/dL, dándonos cuenta que se encuentra en los valores normales, ya que si estuviera de hemoglobina se encontraría en un cuadro de anemia

• CONCLUSIONES

Esta práctica nos es útil para Poder determinar el volumen de Hb que hay en la sangre. Los exámenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigación rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes pueden medir el éxito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por razones médicas o legales

...