Laboratorio De Cultivo In Vitro

ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA

CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES

DISEÑO DE UNA LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS IN VITRO

INTRODUCCIÓN:

El cultivo de tejidos es un grupo técnicas basadas en aislar una porción de planta (explante) y proporcionarle condiciones artificiales físicas y químicas adecuadas para que las células expresen su potencial intrínseco o inducido. El laboratorio de cultivo de tejidos comprende un grupo heterogéneo de técnicas en donde un explante (protoplasto, célula, tejido u órgano vegetal) se cultiva en condiciones asépticas en un medio de cultivo de composición química definida y posteriormente de lo incuba en condiciones ambientales controladas. (Roca & Mroginski, 1993)

Los objetivos de la plantación de un laboratorio de cultivo de tejidos son numerosos y variables, entre ellas tenemos: incremento de la variabilidad genética, conservación e intercambio de germoplasma, conservar especies en vía de extinción, crear una gran número de plantas en poco tiempo para el comercio, obtención de plantas libres de patógenos, estudios de fisiología, genética, bioquímica, entre otras.

Las técnicas de cultivo de tejidos dependen del tipo de explante y del objetivo propuesto debido a que a que cada técnica es específica, por ejemplo la técnica empleada para cultivo de meristemas difiere de la técnica de protoplasto y elementalmente depende del objetivo propuesto.

El diseño de un laboratorio de cultivo de tejidos depende de los objetivos, un laboratorio de investigación tiende a ser de tamaño menor que uno de producción comercial, el de investigación tiene áreas y equipos de enseñanza y demostración, en cambio el de producción será más simple pero más grande con áreas mayores de incubación e invernadero para el gran número de plantas a producirse. Cada uno de ellos deberá tener áreas de establecimiento, crecimiento y multiplicación de plantas producidas, sin embargo el laboratorio de producción comercial tendrá áreas adicionales de cuarentena y evaluación fitosanitaria. (Roca & Mroginski, 1993)

Para el correcto desarrollo de los tejidos se requiere algunas condiciones donde no deben suponer un riesgo para este tipo de cultivos donde debe evitarse (Morgan, 1994):

• Humedad y temperaturas extremas.

• Olores desagradables.

• Corrientes de aire molestas.

• Cambios bruscos de temperatura.

Para el establecimiento de un laboratorio de cultivo de tejidos los principales aspectos que se deben determinar son (Díaz, 2007):

1. Tipo de explante. El explante es cualquier porción de tejido vegetal que sea capaz de responder, depende de la edad, del grado de diferenciación, en donde, un explante más joven y menos diferenciado tendrá una respuesta mejor que uno viejo y mas diferenciado.

2. Medio de Cultivo. El medio de cultivo está conformado básicamente por: nutrientes minerales, una fuente de carbono y vitaminas, adicionalmente puede tener: agente gelificante, agua de coco, extracto de lavadura, extracto de frutos de tomate y extracto de tubérculos de papa.

3. Reguladores de crecimiento. También llamadas fitohormonas, comprende principalmente auxinas, citocininas, giberelinas, etileno, ácido abcísico. Todas ellas se relacionan con procesos de crecimiento celular y división celular.

4. Condiciones ambientales: Las condiciones más importantes son fotoperiodo, tipo e intensidad de la luz, temperatura y humedad.

ORGANIZACIÓN DEL LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS

Las áreas del laboratorio se dividen de acuerdo a la función que se realice, alguna de ellas son áreas sucias, otras son áreas semi-limpias y otras son áreas limpias. Algunas áreas pueden están incluidas dentro de alguna área.

Figura1. Organización de un laboratorio de cultivo de tejidos in vitro comercial.

Las principales áreas son:

ÁREAS NO ESTÉRILES

Oficina: Es el sitio de trabajo para personal administrativo de académico. En esta área se debe incluir implementos como escritorios, computadoras, teléfonos, basureros, agendas, etc. El ingreso puede ser por medio de una puerta batiente ya que en esta área no se requiere tanta asepsia.

Bodega: Es el sitio de almacenamiento de reactivos y materiales, las cuales, son reservas para el laboratorio. Se caracteriza por ser un área obscura para evitar contacto de algunos reactivos con la luz solar ya que se pueden dañar, pero posee algunas ventanas para permitir flujo de aire cuando se requiera. (Garcia &Ibarra, 2005).

Este sitio debe tener básicamente estanterías para guardar materiales. El ingreso puede ser por medio de una puerta batiente ya que en esta área no se requiere tanta asepsia.

Baños: Área de asea personal y de servicio sanitario, diseñado para estudiantes y docentes, posee una bañera y/o ducha, un inodoro o retrete utilizado para la evacuación, un lavabo y un espejo.

Área de Lavado: Se la puede localizar opcionalmente en el área de preparación. Debe contener por lo menos de un lavadero grande con agua fría y caliente y una fuente de agua de alto grado de pureza, para el efecto se puede utilizar destilador de vidrio o de material no tóxico y un desionizador de agua colocado entre el destilador y lavadero. Esta área debe incluir un espacio para guardar agua destilada en botellas plásticas y finalmente debe tener basureros para el material de desecho separado en tres categorías: inorgánico, vegetal y de vidrio.

Área de invernadero: Sitio donde las plantas regeneradas pasa a vivir en condiciones normales, esto se obtiene mediante el proceso gradual de la aclimatización. Por medio de esta área, a las plantas se le elimina de los residuos del medio de cultivo con agua chorro y luego son transferidas a un sustrato estéril como por ejemplo: cascajo, balastro, materia orgánica o algún sustrato comercial. El proceso de aclimatización y la producción en contenedor que exige el cultivo in vitro permite mejorar las condiciones de la simbiosis planta-hongo y permite garantizar La micorrización contrala y específica de los hongos micorrízicos. Este sitio debe incluir una bodega para almacenar los materiales de jardinería, así como también un sistema de aire filtrado, fungicidas, sistema de nebulización, mosquiteros, fertilización, sistemas de irrigación automática y un área para la mezcla de suelos estériles y bancales para maceteros. (Garcia &Ibarra, 2005).

ÁREAS ESTÉRILES

Área de preparación: Se utiliza para preparar los medios de cultivo, tiene mesas de trabajo para la preparación de los medios y para colocar las balanzas,

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