Manual Microbiologia

MANUAL DE PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA GENERAL

Maestra: Martha Flores V.

Indice

PRÁCTICA #1

Uso del microscopio compuesto y tinciones simples y diferenciales de Gram. 04-07

PRÁCTICA #2

Tinciones Selectivas o Especiales 8-10

PRÁCTICA #3

Preparación de medios de cultivo y material estéril 11-14

PRÁCTICA #4

Crecimiento en medio líquido y aislamiento de bacterias aerobias por la técnica de estría cruzada 15-21

PRÁCTICA #5

Cuenta de colonias por las técnicas de vaciado en placa e inoculación en superficie. 22-26

PRÁCTICA #6

Aislamiento y cultivo de Hongos y Levaduras 27-31

PRÁCTICA #7

Aislamiento de bacterias anaerobias 32-33

PRÁCTICA # 8

Pruebas diagnósticas para poner de manifiesto el metabolismo de carbohidratos y proteínas

con propósitos de identificación microbiana 34-39

PRÁCTICA #9

Respiración 40-42

PRÁCTICA #10

Curvas de crecimiento microbiano 43-45

PRÁCTICA #11

Efecto de la presión osmótica sobre la viabilidad y el crecimiento microbiano 46-47

PRÁCTICA #12

Efecto de la temperatura de incubación sobre el crecimiento microbiano 48-49

PRÁCTICA #13

Determinación del punto mortal y del tiempo térmico mortal (PTM y TTM) 50-51

PRÁCTICA #14

Influencia del pH sobre el crecimiento microbiano 52-53

PRÁCTICA #15

Efecto de los metales y de los detergentes sobre la viabilidad de los microorganismos 54-55

Reglamento del laboratorio de Microbiología General

1. El alumno observará puntualidad para arribar al laboratorio, se le dará tolerancia de 10 minutos de la hora fijada.

2. Llevar bata blanca y el material que se le indique en forma individual o por equipo.

3. No se permite comer, beber líquidos o fumar.

4. El cabello lo debe llevar corto o recogido.

5. No se permite platicar o moverse por el salón (asuntos no relacionados con la materia), ya que al trabajar con gérmenes potencialmente patógenos, existen riesgos de contaminación.

6. Deberá asearse las manos con agua y jabón antes y después de trabajar en el laboratorio.

7. Al iniciar una práctica preparará el material y medios de cultivo que correspondan a su equipo.

8. Al finalizar la práctica el alumno esterilizará el material contaminado.

9. Los informes de prácticas se entregarán ocho días después de haber terminado la practica de no cumplir se descontará un punto de la calificación por cada día de retraso.

10. La calificación del curso práctico estará determinada en un 70% por la teoría y un 30% por el laboratorio.

PRÁCTICA #1

Uso del microscopio compuesto y tinciones simples y diferenciales de Gram.

Objetivos

a) El alumno aprenderá a conocer las partes y funciones de los componentes del microscopio de luz visible.

b) El alumno aplicará técnicas de preparación y tinción simples y diferencial para la observación de microorganismos.

Microorganismos:

Levaduras

Bacterias

Aspergillus sp

Material

Microscopio Tela suave y papel seda

Aceite de inmersión Lápices de colores

Frasco con cristal violeta Frasco con safranina

Frasco con alcohol acetona Frasco de lugol

Frasco con azul de algodón Frasco con azul de metileno

Frasco con verde de malaquita Fuente de coloración

Métodos

a) Cuidado del microscopio

1. Transportar el microscopio tomándolo del brazo y de la base.

2. Colocar el microscopio en la mesa de trabajo, asegurándose que no haya vibraciones con ella.

3. Limpiar el microscopio en el orden siguiente:

a) Sistema mecánico, con un trapo suave que no deje pelusa.

b) Sistema óptico, el ocular, objetivos y condensador con papel especial para limpiar.

b) Iluminación del campo visual

1. Conectar y prender la lámpara.

2. Abrir y cerrar el diafragma.

3. Subir o bajar el condensador hasta observar a través del ocular un disco luminoso uniforme.

4. Colocar la preparación en la platina sujetándola por las pinzas.

a) Enfoque de la preparación

1. Enfocar su preparación con el objetivo de menor aumento, haciendo uso del tornillo macrométrico.

2. Repetir el enfoque con el objetivo de mayor aumento haciendo uso del tornillo macrométrico.

3. Poner una gota de aceite de inmersión sobre su preparación (sin tocarla con el gotero) y repetir el enfoque utilizando el tornillo micrométrico.

4. Examinar las preparaciones proporcionadas.

5. Desconectar, limpiar y guardar el microscopio en su lugar.

b) Frotis a partir en un cultivo sólido

1. Marcar en un extremo los portaobjetos limpios y desengrasados.

2. Colocar con el asa una pequeña gota de agua, extendiéndola para formar una película delgada de aproximadamente un centímetro de diámetro en el centro del portaobjetos.

3. Tomar con el asa estéril un fragmento de colonia y hacer una suspensión homogénea en la gota, extendiéndola para dejar una película delgada y uniforme.

4. Fijar el frotis al calor, calentando la parte posterior del portaobjetos.

c) Frotis a partir de un cultivo líquido

1. Tomar con el asa estéril una gota de cultivo y colocarla en el centro del portaobjetos, extendiéndola para formar una película.

2. Dejar secar al aire

3. Fijar al calor

d) Tinción simple de los frotis

1. colocar los portaobjetos de los frotis sobre un puente de coloración.

2. Cubrir el frotis con unas gotas del colorante y dejarlo por un minuto.

3. Tomar el portaobjetos por un extremo y escurrir el colorante.

4. Lavar el exceso de colorante con un chorro de agua.

5. Dejara secar al aire.

6. Examinar las preparaciones con el objetivo de inmersión.

e) Técnica de tinción de Gram

1. Hacer un frotis con cristal violeta y dejarlo actuar por un minuto, escurrir el colorante y lavar agua.

2. Colocar una pequeña porción de lugol y dejarlo actuar por un minuto, escurrir el colorante y lavar con agua.

3. Adicionar alcohol

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