PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

El personal encargado de la preparación de medios de cultivo debe conocer la NOM-065-SSA1-1993, Que

establece las especificaciones sanitarias de los medios de cultivo para poder clasificarlos, para ello

mencionaremos lo siguiente:

Un Medio de cultivo es el material nutritivo en el que se pueden recuperar, multiplicar y aislar los microorganismos,

así como efectuar pruebas de susceptibilidad, proporcionándoles las condiciones ambientales adecuadas para su

desarrollo, estos requieren elementos que se encuentran en su composición química. Los factores que se deben

regular durante el crecimiento son los nutrientes, pH, temperatura, aireación, concentración de sales, y potencia

iónica del medio.

Los componentes necesarios que debe contener un medio de cultivo deben ser:

a.- Fuente de carbono

Los microorganismos obtienen su energía a través de la fotosíntesis o de la oxidación de compuestos orgánicos,

son capaces de utilizar el CO2 como fuente principal de carbono. El carbono se suministra generalmente en forma

de carbohidratos

b.- Fuente de nitrógeno

El nitrógeno es un componente de primer orden de las proteínas y ácidos nucleicos, las fuentes pueden ser los

nitratos, nitritos, nitrógeno, amonio y aminoácidos.

c.- Fuentes de azufre

El azufre es uno de los constituyentes orgánicas de la célula, constituye parte de la estructura de diversas

coenzimas y se encuentra formando parte de la metionina y cisteína, la mayoría de las bacterias toman el azufre

del ión sulfato, otros más lo pueden obtener a partir del H2S.

d.- Fuente de fósforo

Se requiere fosfato como componente de ATP, ácidos nucleicos y coenzimas como el NAD, NADH y flavinas. El

fosfato se asimila como fosfato inorgánico.

e.- Fuentes minerales

Algunos microorganismos requieren de iones Mg2+ y ferroso Fe2+, el magnesio es un componente de la molécula

de clorofila y el hierro es parte de las coenzimas de los citocromos y las peroxidasas. El potasio se requiere para la

función de los ribosomas y el calcio es un constituyente de las paredes celulares de las bacterias Gram positivas

f.- Factores de crecimiento

Se llama factor de crecimiento a la sustancia que favorece el crecimiento pero que el microorganismo es incapaz

de sintetizar. Los factores de crecimiento pueden ser vitaminas del complejo B (tiamina, ácido nicotínico, piridoxina,

biotina), algunas de estas sustancias se pueden obtener del suero, yema de huevo o sangre.

g.- Agar

El agar utilizado en bacteriología es un medio que esta libre de metales tóxicos, compuestos nitrogenados, sales

insolubles, azúcares libres, microorganismos muertos, bacterias termófilas y pigmentos.

El agar es una sustancia coloidal desecada que se extrae de algunas especies marinas de algas rojas,

particularmente de los géneros Gelidium, Gracilaria, Pteroclaida y Acanthopeltis, químicamente el agar es una

mezcla de dos polisacáridos: agarosa y la agaropectina, cuyas estructuras se revelan como polímeros de la

galactosa en sus distintas formas. La proporción de agarosa y agaropectina es variable, con valores extremos de

75 % de agarosa y 25 % de agaropectina, según la clase de algas utilizadas. El agar con agua destilada fría tiene

un poder de hinchamiento superior a veces al 3000%, en agua hirviendo el agar se disuelve totalmente en pocos

minutos. La tendencia a la unión de sus partículas, que en frío se mantienen independientes producen un gel limpio

y transparente que al enfriarse, ya no cede el exceso de agua absorbida. La viscosidad del gel aumenta

paulatinamente a medida que la solución disminuye en su temperatura, gelificando a los 35 –40 °C.

Los ácidos diluidos en frío, no alteran sensiblemente el agar, desde que se introdujo el agar a los medios de cultivo

como agente gelificante ha resultado muy bueno debido a :

a.- Su estructura le confiere gran estabilidad frente a las enzimas microbianas, muy pocas bacterias marinas son

capaces de hidrolizar como Pseudomonas carragenomora.

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b.- Su estabilidad química, le permite mantener el medio al estado sólido prácticamente en cultivos de cualquier

bacteria

c.- Su punto de fusión, superior a 80 °C, permite cultivar en medio sólido bacterias termófilas que se incuban hasta

temperaturas de 65 °C.

d.- Su temperatura de gelificación, inferior a los 39 °C, permite mezclarlos en forma líquida.

e.- Su elevado poder gelificante permite su utilización a muy bajas concentraciones, generalmente del orden del 1

al 1,5 % (m/v) permitiendo obtener geles muy firmes, lo que permite sembrar microorganismos

f.- Su empleo en concentraciones muy bajas permite la obtención de medios semisólidos en los cuales se pueden

realizar pruebas de movilidad

En algunas ocasiones un medio de cultivo posee algunas otras sustancias como colorantes o inhibidores para

favorecer o inhibir el crecimiento de un microorganismo.

Los colorantes e indicadores son de importancia en la preparación de la mayor parte de los medios de cultivo

diferenciales pues, pueden actuar de la siguiente manera:

a.- Como agentes bacteriostáticos

b.- Como indicadores de los cambios de acidez o alcalinidad

c.- Como indicadores redox en ciertos medios de cultivo.

CLASIFICACIÓN

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