Preparacion De Medios De Cultivo

PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo pueden ser:

• Líquidos

• Sólidos

• Semisólidos

MEDIOS LÍQUIDOS

Se preparan todos los constituyentes en una disolución acuosa (agua destilada). Una vez disueltos, se reparten en matraces o tubos de ensayo que tapamos y esterilizamos con calor.

MEDIOS SÓLIDOS

Hacemos lo mismo que para los medios líquidos, pero, al disolver en agua destilada, añadimos de 15 a 20 g/l de agar. Lo esterilizamos y lo depositamos en placas petri cuando está a unos 60º. Cuando alcance los 50º, ya será sólido.

MEDIOS SEMISÓLIDOS

Su apariencia es de gel. Sólo llevan 5 g/l de agar.

RELACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS CON EL OXÍGENO

El oxígeno, como constituyente del agua, es esencial para todos los organismos. Sin embargo, el oxígeno molecular es requerido de diferentes maneras por los microorganismos:

MICROORGANISMOS AEROBIOS

El oxígeno actúa como aceptor final de electrones en la respiración aeróbica. Existen dos grupos de organismos aeróbicos:

Aerobios estrictos. Requieren oxígeno en concentraciones similares a la atmosférica (20%)

Aerobios microaerófilos. Requieren oxígeno en concentraciones inferiores a las de la atmósfera; 5-10%. Presentan enzimas como la hidrogenasa, que son activadas por las presiones parciales del oxígeno. La hidrogenasa proporciona energía para crecer. En concentración atmosférica, la hidrogenasa no se activa y la célula no crece y muere.

MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

Son aquellos organismos que no requieren oxígeno. Distinguimos entre:

Anaerobios facultativos. Crecen en ausencia y en presencia de oxígeno, pero crecen mejor con oxígeno. En ausencia, realizan la fermentación, y en presencia, la respiración aeróbia. Esta última es mucho más rentable, y por ello crecen mejor.

Anaerobios estrictos. Aquellos que, no solo no requieren oxígeno, sino que su presencia los destruye. Su metabolismo no requiere oxígeno, o realizan fermentación o respiración anaerobia.

Anaerobios aerotolerantes. Aquellos que no requieren oxígeno pero lo toleran; no mueren en su presencia. Son microorganismos fermentativos, y se diferencian de los facultativos en que no crecen más con oxígeno.

CULTIVO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS ESTRICTOS

En placas petri sobre medios sólidos. La superficie del medio de cultivo está en contacto con el oxígeno atmosférico, luego no hay ningún problema para cultivar este tipo de microorganismos.

En medio líquido, el microorganismo crece en la disolución, donde la concentración de oxígeno es menor, y disminuye en función del crecimiento del microorganismo. Para evitar esa disminución de oxígeno, utilizamos dos recursos:

• Agitación

• Adición de aire u O2 estéril mediante burbujeo

CULTIVO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS ESTRICTOS

En medio líquido, añadimos al medio de cultivo agentes reductores que toman el O2 disuelto en el agua y forman H2o. Estos agentes son cisteína o tioglicolato, por ejemplo. Otra manera es bombeando CO2 o N2 libre de 02 al medio, mediante burbujeo.

En medio sólido, se emplean jarras de anaerobiosis o jarras de Gas-Pak. Su tamaño es similar al de un termo. En su interior se colocan las placas petri invertidas. El recipiente se cierra con una tapa hermética. En la parte inferior hay un catalizador de paladio. Para conseguir la anaerobiosis, introducimos sobres de anaerobiosis, que contienen NaCO3 y borohidruro de sodio. Al añadir agua al sobre, se libera H2 y CO2. El oxígeno presente se reduce a agua. Para verificar la anaerobiosis hay un indicador, que consiste en una tira de papel impregnada con azul de metileno. En condiciones aeróbicas, la tira es azul, pero sino, es transparente. En la tapa hay un manómetro con el que medimos la presión interna, ya que se están desprendiendo CO2 y H2.

MEDIOS DE CULTIVO

En función de su composición, distinguimos dos grupos de medios de cultivo:

• Medios sintéticos o definidos: Son aquellos que contienen cantidades precisas de sustancias orgánicas e inorgánicas puras disueltas en agua destilada.

• Medios complejos o indefinidos: Contienen sustancias altamente nutritivas, pero de composición indefinida. Suelen llevar sustancias como extractos de carne, peptona, extractos de levadura, bovril... La ventaja de este medio de cultivo es que contiene muchos factores de crecimiento, por lo que podemos cultivar en él gran número de microorganismos. El inconveniente es que no conocemos lo que el microorganismo está consumiendo. Ejemplos:

Caldo nutritivo: extracto de carne + peptona + agua

Agar nutritivo: extracto de carne + peptona + agua + agar.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS ENRIQUECIDOS

Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo normales. Para cultivarlos necesitamos añadir sustancias altamente nutritivas como sangre, suero, extractos de tejidos animales... Estos medios son los medios enriquecidos, y los microorganismos que crecen en ellos son microorganismos exigentes o fastidiosos. Ejemplo: agar-sangre.

MEDIOS SELECTIVOS

Contienen uno o varios compuestos que inhiben el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos y no afectan

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