Práctica 2 Preparación de medios de cultivo

[pic 1]Universidad Autónoma de Baja California
Facultad de Ingeniería

Bioingeniería

Microbiología

Práctica 2
Preparación de medios de cultivo

Maestro:

Grupo:

Alumno:

Mexicali B.C, a miércoles 27 de octubre del 2021.

Competencia

El alumno conocerá los diferentes tipos de medio de cultivo que existen y sus respectivos métodos de preparación, mediante la revisión de información en libros electrónicos, análisis de material audiovisual y simulación casera utilizando gelatina, para adquirir los fundamentos teórico-prácticos con una actitud de respeto y enfoque microbiológico.

Marco teórico

Los medios de cultivo para preparar y envasar en el laboratorio pueden venir deshidratados en polvo, en gránulos o en pastillas para disolverlos en agua destilada y duran muchos años. Para la preparación de los medios de cultivo en un laboratorio de bacteriología pequeño se requiere: autoclave, balanza, de ionizador para obtener el agua destilada, espátula, recipiente o bote para poder aforarlos, calculadora, probeta, Erlenmeyer o matraces, cajas de Petri de vidrio, plástico o desechables, tubos con tapa rosca, papel pH o el equipo para medir el pH, cubículo con luz ultravioleta y sin corrientes de aire para poder envasarlos.

• Pesar los medios

Debe pesarse la cantidad indicada por el fabricante, en cada frasco se encuentra la información, según la marca del medio deshidratado que se va a utilizar. Por ejemplo, si se van a preparar 150mlde agar Mueller Hinton (AMH) y el frasco indica disolver 35 g en un litro de agua destilada, se hace una regla de tres y corresponde pesar 5.25 g del medio de cultivo y disolverlo en 150ml de agua destilada.

• Disolver los medios

Cuando se van a disolver los medios, se mide en la probeta la cantidad de agua requerida (se retoma el ejemplo del numeral anterior: 15ml). La mitad de esta agua se pone en el matraz para que no se pegue el medio de cultivo cuando lo vamos a calentar en la estufa. Enseguida, se pone el medio de cultivo (5.25 g) y con el resto del agua se juaga el bote para que no quede polvo alguno. Se tapa el matraz con su propia tapa o con un tapón de algodón y gasa, en este último caso se recomienda recubrirlo con papel aluminio para que no se mezcle el medio de cultivo con la gasa.

Para disolver, el matraz se pone a calentar lentamente en una estufa, se mezcla cada 30 segundos haciendo un movimiento en círculo grande sobre una superficie (nunca en el aire), esto evita que se pegue el medio sin que se derrame. Los medios que son agares. o sea, para dejarlos sólidos, suben como si fuse la ebullición de la leche, cuando el medio de cultivo se torna translúcido y ebulle mínimo dos veces, está listo para ponerlo en el autoclave.

• Esterilizar medios

Para esterilizar los medios de cultivo, sólidos o agares, que se van a envasar en cajas de Petri, se cubre el tapón del matraz con un papel limpio, este se amarra con un caucho para que la boquilla del matraz quede estéril. Enseguida, se pone en el autoclave si el fabricante así lo recomienda, si lo indicado es esterilizarlo a 121 °C, debe graduarse el autoclave en 15 libras. Las instrucciones de casi todos los medios de cultivo indican "esterilice a 15 Lb por 15 minutos", esto significa que el manómetro debe subir hasta 15 libras y en ese momento se comienza a medir el tiempo. Cuando han transcurrido los 15 minutos se apaga el autoclave y se procede a envasar los medios.

Para verificar la calidad de la esterilización, se controlan: la cinta indicadora de esterilización y las tiras o ampollas con Geobacillus stearothermophilus que se colocan en el autoclave durante el proceso.  La cinta indicadora de esterilización permite realizar un control químico, si aparecen en ella rayas de color negro o café, según la marca, estas indican que ha estado a la temperatura de 121°C, pero este control no garantiza que se hayan eliminado todos los microorganismos. Sirve para controlar paquetes, recipientes, pipetas y tener seguridad acerca de qué cosas fueron esterilizadas y cuáles no.

Todo material de vidrio se envuelve en papel y se le coloca la cinta de control de esterilización. se marcan la fecha de esterilización y la fecha de vencimiento de la esterilización, luego se guarda a temperatura ambiente.

El material de tela se debe envolver en papel e indicar en un rótulo qué se está esterilizando: una sábana, una bata, una funda, etc. Cada paquete debe tener la cinta de esterilización para indicar con rayas negras que está estéril. Si se desea verificar la esterilización, se pasa un escobillón sobre la tela y este se inocula en un caldo nutritivo, se incuba a 37 °C durante 48 horas y se observa el crecimiento bacteriano.

• Medio de cultivo

El control de calidad bacteriológico debe hacerse cada vez que se preparan los medios de cultivo. Consiste en sembrar bacterias conocidas para saber si en el medio se da la reacción esperada. Se debe usar una caja de cada lote para verificar que no se perdió ninguna propiedad cuando este se preparó.

• Control de pH

El medio de cultivo debe quedar con un pH específico, que usualmente debe estar entre 7.0 y 7.6, pero algunas bacterias crecen en pH de 5.5 a 8.5. Por lo tanto, es esencial revisar las instrucciones de la casa comercial que indican a qué pH se debe dejar el medio de cultivo cuando se prepara apropiadamente y verificar que sea el correcto.

Material, equipo y reactivos

Metodología

Parte 1: en casa

1. Se realizo la lectura de los capítulos solicitados.
2. Se reviso el material audiovisual y se tomaron notas de los cuidados durante los procedimientos.
3. Se preparo la gelatina utilizando la mitad del volumen de agua indicado en las instrucciones del sobre en el recipiente y con apoyo del batidor tipo globo.
4. Por lo que se vació medio litro en el recipiente y posteriormente se le agrego la gelatina.
5. Se mezclo con un batidor de globo hasta alcanzar una mezcla homogénea y se vació su contenido en una olla.
6. Se coloco en la estufa la olla y se dejó en el fuego hasta que hirviera.
7. Se aguardo un momento para que la temperatura del líquido bajara y se vació la gelatina en las cajas de Petri hasta un 50% de su capacidad de volumen utilizando una tasa medidora.
8. Se lleno al 50% de su capacidad el tubo de cultivo utilizando una jeringa y se recostó en ángulo para generar un tubo inclinado
9. Una vez solidificada la gelatina, se rotulo el material y se almaceno en el refrigerador

Parte 2: en laboratorio

1. Se tomo el agar nutritivito del almacén y se leyó la etiqueta para saber cómo se prepararía.
2. Se realizo una regla de 3 para saber cuantos gramos de agar se utilizarían para 90ml.
3. La regla de 3 dio 2.07g de agar nutritivo para 90ml de agua, se coloco un platillo de pesaje sobre la balanza y se registró su peso, a su peso se le sumo 2.07g (del agar) para tener un resultado final del peso del agar y del platillo.
4. Se midieron 90ml en una probeta, para después vaciar lo de la probeta a un matraz Erlenmeyer.
5. Se coloco el matraz con el agua sobre una parrilla magnética y se prendió, se le coloco a interior del matraz un imán agitador y tanto la parrilla y el imán se prendieron.
6. Se tomo el platillo de pesaje con los 2.07g de agar y se vació dentro del matraz.
7. Se tapo la boquilla del matraz con el tapo de gasas y algodón y se espero hasta que se logró obtener una mezcla homogénea amarilla clara.
8. Se dejo reposar para que enfríese el agar del matraz.
9. Se tomaron las cajas de Petri envueltas en papel butcher del laboratorio pasado y se introdujeron en el autoclave para su esterilización.
10. Una vez esterilizados se aguardo a que el autoclave se enfriara para sacar las cajas de Petri.

Resultados

[pic 2][pic 3]Parte 1

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Parte 2:

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Discusión de resultados

Se midió medio litro con la taza y se vacío la bolsita de la gelatina, y se puede observar en la figura 2 que se obtuvo un color verde muy intenso ya que se disolvió a la mitad del volumen que indica. Se puede observar cómo se depositó parte de la disolución de la gelatina en una taza en figura 4 para que fuera mas sencillo verte sobre las cajas de Petri, en vez de vaciarlo directamente. Se uso una jeringa para introducir gelatina dentro del tubo de cultivo, esto con el objetivo y fuera lento y cuidado de manera que la gelatina no tocara las paredes el tubo de cultivo. Se dejo la gelatina en las cajas de Petri y tubo, durante las noche para que no hubiera problemas con lo del movimiento de cosas en el refrigerador y se obtuvo a la mañana siguiente su solidificación.

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