Practica 2

Introducción

Todas las células vivas pueden clasificarse en dos tipos, las células Procariontes y las células Eucariontes. Su principal diferencia  es la carencia, en las primeras, de un núcleo (Black, 2008).

La mayoría de los organismos procariontes son unicelulares, es decir que el organismo completo consiste en una sola célula  (Wheelis, 2008). Las bacterias son células procariotas pertenecientes al reino monera que se caracterizan por su tamaño pequeño, oscilan normalmente entre ,5 mµ a 1,0 mµ. (los micrómetros equivalen a 1/1000 mm). La morfología de las bacterias depende de la pared celular que les proporciona rigidez y cierta elasticidad. Individualmente las bacterias pueden aparecer como organismos elipsoidales, esféricos, alargados, cilíndricos o en espiral. La forma es propia de cada una de las especies de bacterias, por lo que se pueden clasificar en: cocos, bacilos y espirales. (Humberto, 2008)

El ordenamiento de las bacterias es un mecanismo por el cual ellas pueden adoptar ciertas formas cuando se encuentran en grupo, esto puede depender de un factor genético  (como en el caso de los cocos) o bien, patrones aleatorios (como ocurre con los bacilos) (Humberto, 2008)

• Los cocos son células ovoides o esféricas. Pueden existir de manera individual, pero en su mayoría se asocian en grupos, lo que facilita su identificación. Se clasifica a los diferentes tipos de cocos dependiendo del tamaño y la estructura de los grupos que forman. (Humberto, 2008) Estos grupos se forman cuando las células se dividen pero no se separan. (Black, 2008) Según el patrón de ordenamiento, los cocos se clasifican de la siguiente manera:

• Diplococos: se forman cuando los cocos se dividen y se quedan juntos para formar pares en un solo plano de división. (Prescot, 1999)
• Streptococos: se agrupan uno detrás de otro en cadenas compuestas de 5, 10, 100 elementos,  en un solo plano de división. (Humberto, 2008)
• Tetradas o Tetracocos: Se forma cuando la división ocurre en dos planos (Black, 2008). Cada grupo está conformado por cuatro unidades. (Humberto, 2008)
• Estafilococos: El ordenamiento al azar produce cúmulos de elementos que se asemejan a un racimo de uvas. Poseen los tres planos del espacio (Humberto, 2008)
• Sarcinas: Esta agrupación se ordena con ocho o más unidades organizadas en forma de cubos de tres planos. (Humberto, 2008)

• Los bacilos son formas bacterianas que se asemejan a una raíz. Hay algunas bacterias que se presentan cortas en forma de raíz, entre un coco y un bacilo, por lo que se les denomina cocobacilos (Prescot, 1999). A diferencia de lo cocos, los bacilos no suelen agruparse, pero cuando lo hacen, la forma no depende de un factor genético, sino de las etapas de desarrollo y las condiciones de cultivo. Se pueden presentar en parejas o diplococos, cadenas o estafilococos, o en grupos irregulares o empalizados.
• Espirales o Helicoidales: Estas células no presentan un ordenamiento específico porque generalmente se encuentran aisladas con una o varias curvaturas, según la especie, los espirales presentan una longitud, amplitud de la espira y rigidez de la pared diferentes. Entre estas formas bacterianas se encuentran:

• Vibrios o vibriones: Estas especies tienen una sola curvatura, toman una forma similar a una especie espiral incompleta. (Humberto, 2008)

• Espirilos: Son bacilos incurvados helicoidalmente, móviles, generalmente por “penachos” de flagelos polares. (Humberto, 2008)
• Espiroquetas: Son formas alargadas que presentan una gran cantidad de curvaturas muy próximas entre sí. (Humberto, 2008)

Recientemente se han descrito bacterias en forma de estrella, piriforme, discoidal, con apéndices o yemas y planas cuadrangulares.

• Bacterias con apéndices o yemas :  presentan protuberancias celulares en forma de largos tubos
• Bacterias filamentosas: forman células largas y delgadas o cadenas de células. 

La pared celular o pared bacteriana es una estructura fundamental para la bacteria, ésta se ubica antes de la membrana citoplasmática. Es una cubierta rígida que le da estructura y protección a la bacteria, principalmente de los posibles cambios de presión osmótica que puedan llegar a surgir del medio en el que se encuentran. Ésta pared la componen polisacáridos, proteínas y lípidos, estructurados según se trate de bacterias Gram positivas o Gram negativas. La pared puede visualizarse mediante una técnica de tinción bacteriana de tipo diferencial, descubierta por el científico danés Christian Gram, la cual se conoce como tinción Gram. Ésta coloración se basa en la capacidad de las bacterias de retener el colorante primario (cristal violeta), a causa de las diferentes estructuras en las paredes celulares. Como ésta coloración se clasifica en compleja y diferencial, el resultado de la técnica clasifica a las bacterias en Gram positivas o Gram negativas (Humberto, 2008)[pic 1]

[pic 2]

Justificación  

Es importante para el biólogo en formación, desarrollar destrezas para la preparación y clasificación de muestras que se observarán al microscopio; y es esencial dominar la técnica de tinción Gram para identificar la morfología de bacterias Gram negativas y Gram positivas.

Hipótesis:

Se identificarán bacterias usando el método, tinción de Gram y de acuerdo al color que tomen se clasificarán en Gram positivas  y Gram negativas. Además  se observarán e identificarán las distintas morfologías de las bacterias.

Objetivo general

Que el equipo:

• Identifique las principales diferencias morfológicas entre distintas especies de bacterias.

Objetivos particulares

• Desarrollar la tinción de Gram y establecer la  importancia en la identificación y diferenciación de bacterias.
• Observar al microscopio una bacteria Gram positiva, una bacteria Gram negativa, y diferenciarlas.

Métodos.

1. Encender microscopio
2. Hacer iluminación Köhler
3. Esterilizar dos asas bacteriológicas por incandescencia al fuego del mechero Bunsen hasta rojo vivo.
4. Enfriar asas con agua
5. Hacer frotis en portaobjetos.
6. Tomar una gota del cultivo líquido de Rhodobacter sphaeroides, una de Streptomyces venezuelae y una de Escherichia coli, y se colocó cada una en un portaobjetos.
7. Secar y fijar la muestra de cada uno con la flama del mechero Bunsen.

Procedimiento para la tinción de Gram:

1. Teñir ambas preparaciones, previamente fijadas, con tres gotas de cristal violeta, durante un minuto; se lavó con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.
2. Agregar lugol hasta cubrir por completo la preparación, dejar reposar durante un minuto y lavar el exceso de colorante.
3. Decolorar las muestras con una mezcla de alcohol-acetona, por treinta segundos; después quitar el exceso de colorante con agua destilada.
4. Teñir ambas preparaciones con safranina durante un minuto, y lavar con agua.
5. Retirar el remanente de agua y de colorantes con ayuda de papel absorbente.
6. Colocar al microscopio las muestras para su exploración y observación con los objetivos 10x, 40x y 100x. (para observar en 100X se debe usar el aceite de inmersión)

Resultados

Se logró llevar a cabo la técnica de tinción de Gram con la que se clasificó a las especies de Streptomyces venezuelae, Escherichia coli y Rhodobacter sphaeroides  en bacterias Gram positivas y Gram negativas de acuerdo al color que tomaron.

Además se observó la  morfología de las bacterias antes mencionadas en el microscopio a 40x y 100x.

En la tabla 1 y 2 se muestran dos tablas en la que se detallan las observaciones realizadas en el microscopio.

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