Reporte de Bioquímica Estructural

INTRODUCCION

Los métodos y técnicas en bioquímica son muy importantes porque las biomoléculas presentan ciertas características que no permiten la  utilización de técnicas de uso común. Por ejemplo, las concentraciones de las moléculas en un sistema biológico son muy bajas y las mezclas son muy complejas; algunas de las propiedades fisicoquímicas de las biomoléculas son parecidas lo que dificulta su separación, las moléculas que comprenden el estado vital son macromoléculas más difíciles de fraccionar y purificar que las de bajo peso molecular y además sufren un proceso denominado desnaturalización que implica cambios en su estructura y su función al variar las condiciones ambientales naturales como pH, temperatura, solventes, etc.

La homogeneización consiste en desintegrar el tejido y romper la envoltura celular (pared y/o membrana celular) para liberar el contenido de las células. Liberar a la sustancia de interés en forma soluble de la célula o del tejido sin provocar perdida de actividad, esto se logra rompiendo a la célula para producir un sistema llamado homogenado.  La principal contribución de esta técnica es su papel de etapa preliminar para la separación de componentes celulares que permite la deducción de la localización de los procesos metabólicos intracelulares.

Existen diferentes para lisar a las células y la elección de un método en particular depende del objetivo de la investigación y del material a procesas. Las técnicas más comunes son: Homogenización, molienda, exposición a frecuencias ultrasónicas, choque osmótico, uso de detergentes, expulsión a alta presión y tratamiento enzimático.

Las técnicas de separación por centrifugación se basan en el comportamiento de las partículas ante un campo centrífugo aplicado. Las partículas están suspendidas en un medio liquido especifico contenidas en un tubo situado en un rotor.

Las partículas que difieren en densidad, tamaño o en forma sedimentan con diferentes velocidades, cuando se someten a un campo centrifugo. La velocidad de sedimentación dependen del campo centrifugo (G) aplicado.

La cromatografía es un método de separación que se basa en las diferencias de migración de los componentes de una mezcla sobre una fase estacionaria por la influencia de una fase móvil. Todos los sistema cromatograficos constan fundamentalmente de dos fases; una de ellas es la fase estacionaria, que puede ser sólida, liquida o una mezcla sólida-líquida inmovilizada. La segunda fase, la fase móvil, puede ser liquida o gaseosa. La selección de las fases se hace de forma tal que los compuestos a separar tengas distintos coeficientes de distribución y de acuerdo a las diferentes técnicas.

Cromatografía en papel.

Esta técnica se basa en el principio de que un compuesto se reparte o distribuye entre dos fases liquidas. En un ambiente que contiene vapor de agua el papel  de cromatografía absorbe una cantidad de agua que la mantiene entre las dos fibras celulosas. La fase estacionaria la constituye el agua y la fase móvil una mezcla de disolventes orgánicos que se moverán atravez del papel por capilaridad arrastrando a los componentes de la mezcla que se distribuyen de acuerdo a sus coeficientes de reparto. Cuanto más soluble sea el soluto en la fase móvil, tanto más se trasladara el compuesto por el papel en dirección del flujo del disolvente y viceversa.

Cromatografía en columna.

En la cromatografía de absorción por columna, la separación de mezclas tiene lugar en una columna de un absorbente adecuado introducido en un tobo de vidrio. Se pone la mezcla en la columna y se hace pasar por ella un disolvente apropiado o una mezcla de disolventes. Las sustancias que tienen los más altos coeficientes de distribución efectivos se trasladaran más rápido hacia abajo en la columna. El desarrollo de la columna se practica incrementando la polaridad del disolvente (elución por gradiente). Algunos pero no todos los componentes de la muestra de la mezcla resultaran eluidos con el disolvente inicial, para extraer los componentes más firmemente adsorbidos hay que emplear un disolvente más polar.

Observaciones y resultados.

OBJETIVO GENERAL.

 Extraer y separar  los diferentes tipos de pigmentos de la espinaca, por  medio de técnicas bioquímicas como: homogeneización,  centrifugación, cromatografía en papel  y en columna.

OBJETIVOS PARTICULARES.

Conocer los conceptos fundamentales en los que se basan la homogeneización, centrifugación  y la cromatografía.

Aprender a preparar un extracto de pigmento de  plantas (espinaca), por medio de la homogeneización mecánica con mortero y la centrifugación.

Aprender a  separar por cromatografía  en papel  y  en columna  la mezcla de pigmentos extraídos de la espinaca.

METODOLOGIA.

La indicada por el manual de Bioquímica, correspondiente a la practica 3. “HOMOGENEIZACIÓN, CENTRIFUGACIÓN Y CROMATOGRAFIA”, Pág. 40-43.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS.

Tabla 1 de resultados

 Tabla 2 de resultados cromatografía en papel

Tabla 3 de cromatografía en columna

CROMATOGRAFIA EN PAPEL.

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