Determinación Del Contenido De Vitamina C

Determinación del contenido de vitamina C

Se utilizó el método espectrofotométrico reportado por Al-Ani et al. (2007) para la determinación del contenido de vitamina C.

1. Fundamento

Este método se basa en la cuantificación espectrofotométrica del complejo coloreado formado por la reacción entre los productos de oxidación del ácido ascórbico y el reactivo 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNP). El método colorimétrico de 2,4-dinitrofenilhidrazina ampliamente utilizado para la determinación del nivel de ácido ascórbico en los fluidos biológicos se adaptó a la estimación total contenido de vitamina C en las frutas.

El procedimiento depende del principio de la oxidación de ácido L-ascórbico en ácido dehidroascórbico y 2,3-dicetogulónico, seguido de la reacción con 2,4-dinitrofenilhidrazina. Después del tratamiento con ácido sulfúrico, un producto de color rojo parduzco se forma cuya absorbancia se mide a 520 nm.La absorbancia del color formado es proporcional a la cantidad de ácido ascórbico (más ácido dehidroascórbico) presentes en la solución antes de la oxidación.

2. Reactivos

- Ácido metafósforico al 6%

- Ácido sulfúrico 4,5mol/L

- Ácido sulfúrico 12 mol/L

- 2,4-dinitrofenilhidrazina al 2.2%

- Tiourea al 5%

- Solución sulfato de cobre al 1%

- Ácido ascórbico

2.1. Solución de ácido metafosfórico al 6%

Se disolvió 60g de ácido metafosfórico en 400 mL de agua destilada. Se mezclo bien y se transfirió en un fiola de 1L y se enrazó con agua destilada hasta la línea de aforo. Se almacenó a 4°C por un tiempo no mayor a una semana.

2.2. Solución de 2,4 dinitrofenilhidrazina al 2.2%

Se disolvió 4,84g de 2,4 dinitrofenilhidrazina en 220 mL de una solución de ácido sulfúrico 4,5 mol/L. Se mezclo bien, se friltro y se transfirió a un fraco. Se almacenó a 4°C por un tiempo no mayor a una semana.

2.3. Solución de tiourea al 5%

Se disolvió 5g de tiourea en 20 mL de agua destilada. Se mezclo bien y se transfirió en un fiola de 100mL y se enrazó con agua destilada hasta la línea de aforo. Se almacenó a 4°C por un tiempo no mayor a un mes.

2.4. Solución de sulfato de cobre al 1%

Se disolvió 1,56g de sulfato de cobre (CuSO4•5H2O) en 20 mL de agua destilada. Se mezclo bien y se transfirió en un fiola de 100mL y se enrazó con agua destilada hasta la línea de aforo. Se almacenó a 4°C por un tiempo no mayor a un mes.

2.5. Reactivo dinitrofenilhidrazina-tiourea-sulfato de cobre (DTC)

Se combinó 10 mL de solución tiourea al 5%, 10 mL de solución sulfato de cobre al 1% y 200 Ml del reactivo 2,4-dinitrofenilhidrazina al 2,2% Se mezcló bien y se almaceno en una botella ambar cerrada a 4°C por un tiempo no mayor a una semana.

2.6. Soluciones de trabajo o estándares

Se empleo

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