Determinación de Vitamina C

Fundamento:

Determinación de Vitamina C

La vitamina C, o ácido ascórbico, es un compuesto hidrosoluble de 6 átomos de carbono relacionado con la glucosa. Su papel biológico principal parece ser el de actuar como cofactor en diversas reacciones enzimáticas que tienen lugar en el organismo. El ácido ascórbico actúa como coenzima de las hidroxilasas de prolina y lisina, encargadas de hidroxilar la lisina y prolina en el protocolágeno, modificación necesaria para que éste pueda formar los enlaces cruzados para formar las fibrillas de colágeno. En este sentido, la vitamina C es importante para el mantenimiento del tejido conjuntivo normal, para la curación de heridas y para la formación del hueso, ya que el tejido óseo contiene una matriz orgánica con colágeno.

Entre los síntomas de carencias leves de vitamina C se encuentran la facilidad para producir heridas, debido al incremento de la fragilidad de los capilares. El escorbuto está asociado con una disminución en la capacidad de curar heridas, osteoporosis, hemorragias y anemia.

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La vitamina C es un compuesto inestable, debido a la facilidad con la que se oxida e hidrata. Se destruyen con facilidad en el procesamiento y conservación de los alimentos, por lo que es utilizada como indicador de la pérdida vitamínica de un alimento durante su procesamiento y almacenamiento. Por otra parte, el calor y los cationes metálicos (cuidado al cocinar en recipientes de cobre) destruyen la vitamina C. Alimentos como los cítricos, kiwi, fresones, brócoli, lechuga, entre otros, son fuente natural de vitamina C, y su contenido depende de la especie, área geográfica en las que son cultivados, las condiciones de almacenamiento una vez recogidos y del estado de maduración (generalmente aumenta con la maduración).

La cromatografía y la titulación volumétrica de óxido-reducción son métodos utilizados para cuantificar el contenido de vitamina C de un alimento. La cromatografía líquida de alta precisión (HPLC) es el método más utilizado por ofrecer una gran precisión de los resultados.

Equipos, materiales y reactivos

Equipos:

1. Cormatografo liquido de alta resolución de Agilert 1100, con detector de arreglo de diodos, columna de fase reversa C-18 de Agilert de 15 cm con resina de tamaño de poro de 5microlitros
2. Balanza analítica Sartorius, con sensibilidad de 0.1 mg
3. Equipo de filtración al vacio
4. Equipo de agua ultrapura
5. Licuadora recondable con aspas de acrílico
6. Centrigufa Materiales:

1. Fiolas de 25 ml, 50 ml, 100 ml y 500 ml
2. Filtros de me,brana, filtros jeringa
3. Tubos de ensayo de 15 ml, de plástico y graduados
4. Micrpipetas de 20 a 200 microlitros y 100 a 1000 microlitros
5. Probeta de 1000 ml Reactivos:

1. Solucion estándar de vitamina C de 1000 ppm: 250 ml
2. Acido fosfórico 0.05 N: 500 mL

c) 𝑁𝑎𝐻2𝑃𝑂4 1% (p/v) : 500 mL

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Muestra de jugo de Naranja        muestra Bebida Gaseosa “Fanta”

Centrifugador

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Solucion de Acido fosforico        [pic 17][pic 18]

Cromatógrafo liquido de alta resolución de Agilent 1100        

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Procedimiento

Ejecutamos con 2 etapas:

Etapa A: Preparación de soluciones

1. Fase móvil, 𝑁𝑎𝐻2𝑃𝑂4 1% (p/v): Para 500 ml solución pesar en la balanza analítica 5.0 5 de la sal, disolverla con agua ultrapura eb un vaso de precipitación de 250 ml, luego transferirla a una fiola de 500 ml donde se afora con agua ultrapura. Filtrar la solución al vacio empleando filtro de membrana de 45 microlitros.
2. Solución de acido fosfórico 0.05 N: La solución concentrada de acido fosfórico tiene una concentración de 45.0 N luego para preparar 900 ml e solución 0.05 N medir con una pipeta 1.0 ml de la solución concentrada en una probeta de 1000 ml y completar con agua ultrapura a 900 ml.
3. Soluciones estadar de vitamina C de 1000 ppm: Pesar en una balanza analítica exactamente 0.1000 g de reactivo vitamina C, transferirlo rápidamente a una fiola de 100 ml donde se le disuelve con un poco de solución de acido fosfórico

0.05 N y posteriormente se afora con la misma disolución. Se conserva luego en refrigeradora a 4ºC

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