CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE QUIMICA

LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA

(ANTECEDENTES)

Practica No 7. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

López Díaz José Ángel clave 12

Peña Muñoz Edgar clave 16

I. PURIFICACIÓN DEL PRINCIPIO ACTIVO DE UN MEDICAMENTO.

Se coloca la columna de cromatografía en un soporte con ayuda de unas pinzas de tres dedos, de tal forma que se encuentre totalmente vertical y con una altura al tamaño de los frascos viales.

Para empacar la columna, se coloca la llave de la columna en posición de cerrado (si la llave es de vidrio, se deberá engrasar ligeramente). Se introduce hasta el fondo un pequeño pedazo de algodón con ayuda de una varilla de vidrio o de metal, se agregan 5 mL del eluyente (AcOEt) y se presiona suavemente el algodón para eliminar las burbujas. Se prepara una suspensión de sílica gel para columna, 6 g en 30 mL de eluyente y se agita la suspensión hasta que no se observen burbujas de aire. Con ayuda de un embudo de vidrio se vierte la suspensión en la columna lo más rápido posible y se golpea ligeramente la columna con los dedos para que el empaquetamiento sea uniforme. Se abre la llave para eliminar el exceso de disolvente cuidando de no dejar secar la silica gel, se debe mantener el eluyente aproximadante a 0.5 cm arriba de la sílica

En un vaso de precipitados de 100 mL se disuelve la mezcla problema con la mínima cantidad de eluyente (de 2 a 3 mL, recuerde que los medicamentos contienen excipientes que no son solubles en el disolvente orgánico que se va a usar), con ayuda del agitador, se vierte lo más rápido posible y con cuidado para no mover la superficie de la sílica en la columna. Se abre la llave para colectar el eluyente y que se adsorba la muestra aplicada, se debe tener cuidado de que la columna no se seque (la introducción de la muestra se puede también hacer directamente, adicionando el polvo con mucho cuidado de que no quede en las paredes de la columna).

Se marcan los frascos viales a 6 mL y se colectan las fracciones (eluatos), se verifica la separación realizando cromatoplacas (se preparan las cromatoplacas y capilares previamente como la práctica anterior). En cada cromatoplaca se aplican 4 de sus fracciones y un testigo como se indica en la Figura 1.

Se eluyen las cromatoplacas en una mezcla del eluyente utilizado y se observa en cuales fracciones hay presencia del compuesto separado revelando con una cámara de UV o una cámara de yodo. En cada cromatoplaca se debe observar el cambio de coloración de la mancha del producto principal (a menor concentración menor intensidad de color).

Para recuperar el principio activo se destila el disolvente por medio de una destilación simple usando como fuente de calentamiento un baño María, se deja un residuo de 5 mL aproximadamente y se vierte en un vidrio de reloj para que termine de evaporarse en la campana. Finalmente se pesa el producto recuperado y se calcula el rendimiento

V. LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA COMO CRITERIO PARCIAL DE IDENTIFICACION.

Se desea identificar los componentes de algunos medicamentos utilizando la técnica de cromatografía en capa fina comparándolas con una muestra patrón. En este caso se puede utilizar Cafiaspirina® (ácido acetilsalicílico y cafeína) y Aspirina (ácido acetilsalícilico) pero pueden usarse otros medicamentos.

Las soluciones se preparan moliendo una tableta de cada medicamento. La muestra se coloca en un frasco vial y se adicionan 3 mL de acetato de etilo y se agita con cuidado para no derramar la muestra, se deja reposar por 5 minutos para que se sedimente el excipiente y se marcan como Muestra 1 y Muestra 2.

Se preparan dos cromatoplacas iguales aplicando las soluciones en cada una y usando una sustancia patrón de cafeína

Se eluyen las cromatoplacas, una en metanol y la otra en acetato de etilo, se dejan secar, se revelan con luz UV y después con yodo anotando los resultados observados en cada una.

VI. LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA COMO CRITERIO PARCIAL DE IDENTIFICACION (OPCIONAL).

Se desea identificar los componentes de una mezcla, por medio de su comportamiento en cromatografía en capa fina y comparándolo con el de sustancias estándar bajo las mismas condiciones experimentales. Para esto, se proporcionarán las soluciones 6A y 6B (nipagín y nipasol, respectivamente). Se preparan dos cromatoplacas y en ambas se aplican las muestras

Se eluye una de las cromatoplacas con AcOEt, se revela con luz UV y después con yodo. Se anotan las observaciones. La otra cromatoplaca, se debe eluir varias veces (aproximadamente 3) con un eluyente de menor polaridad, por ejemplo, una mezcla de hexano/AcOEt (4:1), dejando secar la cromatoplaca y revelándola con luz UV entre una elución y otra hasta

observar la separación de los compuestos.

ANTECEDENTES

a) Concepto de cromatografía. Tipos de cromatografía. Cromatografía de adsorción y cromatografía de partición. Ejemplos.

La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil.

Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo

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