Carbohidratos procedentes de larvas del coleóptero

SEPARACIÓN DE OLIGOSACÁRIDOS, DISACÁRIDOS Y MONOSACÁRIDOS POR CROMATOGRAFÌA DE CAPA FINA EN Ancognatha ustulata

Sotomayor YonaykerA, Carrillo DoménicaB, Mosquera Marco C

A Universidad Técnica de Ambato, Facultad de Ciencia e Ingeniería en Alimentos y Biotecnología, Ambato, Ecuador

ysotomayor1934@uta.edu.ec

Resumen

En presente artículo se realizó la separación de carbohidratos procedentes de larvas del coleóptero (Ancognatha ustulata) mediante la técnica de cromatografía de capa fina, se utilizó distintos eluyentes en la fase móvil (butanol, ácido acético glacial y agua) con una relación de 10:5:5 v/v. Los carbohidratos identificados fueron: threalosa, fructosa, glucosa, xilosa con un Rf de 0.45, 0.6, 0.65 y 0.72 respectivamente, se presentaron solapamientos en las bandas, pero se lograron identificar mediante la intensidad del color, el mejor eluyente de la fase móvil fue una combinación de ácido acético glacial y agua en una relación de 10:5:5 v/v/v y el mejor revelador con el que se obtuvo la mejor resolución fue el  2,7-naftalenodiol en un medio ácido.

Palabras clave: carbohidratos, larvas, cromatografía.

Abstract

In this article, the separation of carbohydrates detected from beetle larvae (Ancognatha ustulata) was performed using the thin layer chromatography technique, different eluents were selected in the mobile phase (butanol, glacial acetic acid and water) with a ratio of 10: 5: 5 v / v. The carbohydrates identified were: threalose, fructose, glucose, xylose with an Rf of 0.45, 0.6, 0.65 and 0.72 respectively, there were overlaps in the bands, but they were identified by color intensity, the best eluent of the mobile phase was A combination of glacial acetic acid and water in a ratio of 10: 5: 5 v / v / v and the best developer with which the best resolution is obtained was 2,7-naphthalenediol in an acidic medium.

Keywords: carbohydrates, larvae, chromatography.

1.  INTRODUCCIÓN.

Los carbohidratos, glúcidos, hidratos de carbono o también llamados sacáridos son compuestos orgánicos que contienen en su estructura átomos de carbono, hidrógeno y oxígeno en una proporción 1:2:1. Constituyen la fuente de energía más importante en la dieta y se los puede obtener de distintos alimentos. Estas moléculas pueden estar aisladas o como asociaciones químicas o físicas mediante enlaces glucosídicos (Mark Berg, Stryer, and Tymoczko 2007).

La base de estas moléculas son monosacáridos hasta nueve átomos de carbono y que varían en la configuración estereoquímica de uno o más centros asimétricos, estos monosacáridos pueden enlazarse en disacáridos u oligosacáridos dando lugar a una gran diversidad de moléculas que son un desafío en el campo de la bioquímica para conocer exactamente su síntesis y función biológica (Voet, Voet, and Pratt 2007).

Las principales funciones de los carbohidratos es que son la fuente de glucosa para el metabolismo y consecuentemente, obtención de energía especialmente para los músculos, estimulan la producción de serotonina, equilibran los niveles de colesterol, ayudan en la salud intestinal y cumplen una función estructural en las células. Entre las desventajas se tiene que los niveles altos de glucosa en la sangre producen trastornos metabólicos como la diabetes, originan enfermedades oftalmológicas y generan desarreglos hormonales (Torres Cifuentes, Cortés Torres, & Ayala, 2015).

Se han desarrollado algunas técnicas para determinar cuantitativamente la concentración total y el tipo de azúcares que se encuentran presentes en las muestras de alimentos y biológicas. Entre las cuales los métodos cromatográficos sobresalen para el análisis tanto cualitativo como cuantitativo de mono y oligosacáridos (Alvarado et al. 2014).

La cromatografía en capa fina (CCF), cromatografía de gases (GC) y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se usan comúnmente para separar e identificar los carbohidratos.  Los hidratos de carbono se pueden separar e identificar con base en sus coeficientes y reparto, polaridades o tamaños, dependiendo del tipo de técnica cromatográfica (Roca, Oliver, & Rodríguez, 2003).

El método de cromatografía de capa fina se basa en la comparación del tamaño e intensidad de las manchas en relación con una serie de patrones que son diluciones de una concentración conocida del analito al cual se ejecuta el mismo proceso cromatográfico.  La ventaja de este método es que se puede separar más rápido los componentes, visiblemente dar lugar a mejores separaciones y la posibilidad de elegir entre distintas fases estacionarias normalmente se utiliza gel de sílice o alúmina, este método es ideal por su rapidez y porque se consiguen mayores resoluciones (Alvarado et al. 2014).

Como una contribución al conocimiento de las técnicas de separación de biomoléculas se planteó la identificación de forma cualitativa de algunos tipos de carbohidratos a partir de larvas de Ancognatha ustulata por medio de la técnica de cromatografía en capa fina.

1. METODOLOGÍA

II.I. Recolección e identificación de las muestras

Se realizó la recolección de 80 larvas de A. ustulata en un cultivo orgánico de Solanum tuberosum del municipio de Ziaquirá-Cundinamarca (2 652 msnm, ubicado en las siguientes coordenadas 5° 1'49.82"N, 74° 2'41.92"O)  (Torres Cifuentes, Cortés Torres, & Ayala, 2015).

II.II. Preparación de las muestras

Se colectaron 150 larvas en Zipaquirá, departamento de Cundinamarca a 2.652 msnm, estas fueron tomadas directamente de un cultivo orgánico de Solanum tuberosum con 50 a 60 cm de profundidad mediante un muestreo aleatorio. Se seleccionaron y separaron los especímenes de primer y segundo instar de las del tercer estadio, llevándolas a un cajón con tierra y plantas del mismo cultivo, se transportaron al laboratorio y mantuvieron vivas hasta su análisis.

Las larvas fueron lavadas, se durmieron con éter etílico y se registró su peso en una balanza Sartorius (BB221S).  Para la disección se separó la cabeza del cuerpo, se realizó un corte lateral entre las pleuras y se extrajo el sistema digestivo, quedando la piel junto con el  contenido graso digestivo, utilizados para la determinación de carbohidratos se tomó 0,1 g  de muestra (n 25) (Torres Cifuentes, Cortés Torres, & Ayala, 2015).

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