Determinacion De TGP

TGP (ALT)

OBJETIVO GENERAL:

Determinar la concentración de alanina aminostransferasa (TGP) sérica e interpretar los resultados obtenidos.

INTRODUCCIÓN:

La transaminasa glutamicopiruvica (TGP) es una enzima intracelular, se encuentra principalmente en las células del hígado y en el riñón.

Su mejor aplicación es en el diagnóstico de las enfermedades del hígado, se observan niveles elevados en enfermedades hepáticas como la hepatitis, enfermedades de los músculos y traumatismos.

Cuando se emplean en conjunto con la ALT se mantiene dentro de los límites normales y aumenta en los niveles de AST. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

PRINCIPIO DE MÉTODO:

La alanina aminotranferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutamico pirúvato (GPT) cataliza la transferasa reversible de un grupo amino de la alanina a-cetoglutamo en la formación de glutamo y piruvato. El piruvato producido a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) Y NADH₂.

Alanina + a- cetoglutarato → (ALT) → Glutamo + piruvato

Piruvato + NADH+H+ → (LDH)→ Lactato + NAD +

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de ALT en la muestra ensayada.

o REACTIVOS

R₁

Tampón TRIS pH 100 mmol/L

L-alanina 500 mmol/

R₂

Substracto NADH 0,18mmol/L

LACTATO deshidrogenasa (LDH) 1200 u/L

a-cetoglutarato 15mmol/L

o MATERIAL ADICIONAL

- Espectrofotómetro o analizador para las lecturas a 340 nm

- Baño termostable a 25° c,30°c,37°c (i,0.4°c)

- Cubetas de 1.0 cm paso de luz

- Equipamiento habitual de laboratorio

o MUESTRA

- Suero o plasma

PROCEDIMIENTO

1.- Condiciones de ensayo:

- Longitud de onda

-Cubeta

-Temperatura constante

2.- Ajustar el espectro fotómetro a cero frente a agua destilada a diez.

3.- Pipetear en una cubeta

RT(Ml)

MUESTRA (µL) 1.0

100

4.- Mezclar, incubar 1 minuto

5.- Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

6.- Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ϪA/min).

CALCULOS :

ϪA/min x 1750 : U/L de ALT

Unidad: la unidad internacional (IU) es la cantidad de enzima que contiene 1 mmol de substratos por minuto, es condiciones estándar, la concentración se expresa en unidades por litro (u/L).

o FACTORES DE CONVERSION DE TEMPERATURAS

Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:

Temperatura de Factores a convertir:

Medición 25°C 30°C 37°C

25°C

30°C

37°C 1,00

0,76

0,55 1,32

1,00

0,72 1,82

1,39

1,00

o CONTROL DE CALIDAD :

Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorado: SPINTROL H normal y patológico (ref.1002120 y 1002210) Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica. Cada laboratorio debe disponer su propio control de calidad y establecer correspondientes en el caso que los controles no cumplan con las tolerancias.

VALORES DE REFERENCIA

25°C 30°C 37°C

HOMBRES HASTA 22 U/L 29 U/L 40 U/L

MUJERES HASTA 18 U/L 22 U/L 32 U/L

En recién nacidos normales se han descripto valores de referencia hasta el doble de los adultos, a su inmadurez hepático, estos valores se normalizan aproximadamente a los 3 meses.

o INTERFERENCIA

Los anticoagulantes de uso corriente como la heparina, EDTA, oxidato o fluoruro no afectan los resultados. La hemolisis interfiere con la determinación, se ha descripto varias drogas y otras que interfieren en la determinación de AlT.

RESULTADOS

Resultados:

Integrantes del equipo Resultados de los cálculos (U/L)

U/L

U/L

PROMEDIO:

DISCUSION

CONCLUSION

BIBLIOGRAFIA:

o Kathleen Morrison Treseler

“Laboratorio Clínico Y Pruebas De Diagnóstico”

Editorial Manual Moderno

7th Edición

México D.F 2006

Pp.278 A 283

o Francés T. Fischbach

“Manual De Pruebas Diagnósticas”

Editorial Interamericana

5th Edición

México D.F 2003

Pp. 168 -174

o http://www.medlineplus.com/examen_de_alanina_aminotransferasa/html.

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