Determinacion de proteina en huevo

INFORME N° 2

ESPECTROFOTOCOLORIMETRÍA
Determinacion de proteina en huevo

Anderson Avila, Viviana Deaza, Juliana Gonzalez, Natalia Monroy, Ana Maria Socha

Fecha práctica: 09 de Marzo de 2018; Fecha entrega informe: 06 de Marzo de 2018

1. MATERIALES Y MÉTODOS

Para el desarrollo de la práctica se utilizaron los siguientes materiales y reactivos:

- Espectrofotómetro
- 8 tubos de ensayo
- 2 pipetas
- 2 pipeteadores
- 3 Erlenmeyer de 250 ml

- 2 beaker de 500 ml  

- 1 plancha calentamiento

- 2 agitadores magnéticos

- Clara de huevo

Reactivos:
- 200  ml de reactivo de Folin Ciocalteau diluido ¼

- 200 ml de Solución albúmina de huevo mg/ml
- 200 ml de Reactivo A (Na2CO3 al 2%), NaOH (0,1 M)
- 150 ml de Reactivo B1 (CuSO4, 5H2O al 1%)

- 150 ml de Reactivo B2 (Tartrato sódico - potásico al 2%)

El procedimiento inicio enumerando los tubos de ensayo de 10 ml de 0 al 6. Se procedió a preparar reactivo C (mezcla de los reactivos: A, B1        y B2, en proporciones 50:0,5:0,5 en volumen). luego se tomó las cantidades        de agua, solución patrón de albúmina y solución problema señaladas en la tabla 1.

Para las muestras problema con clara de huevo se realizaron dos  diluciones (1:100 y 1:50) las cuales fueron tomadas como se indica en la tabla para los tubos 5 y 6 cada una.

Tabla 1. Cantidades establecidas para la preparación de la curva.

A cada tubo de ensayo se le agregó el reactivo C, mezclando el contenido de cada uno de estos y dejándolo reposar 15 minutos en oscuridad (dentro de la gradilla). Por último se añadió a todos        los tubos el reactivo de Folin  (diluido 1/4), mezclándolo bien y dejándolo reposar 30 minutos en la oscuridad para que así se desarrolle completamente la reacción coloreada. Una vez ya estén los tubos con los reactivos correspondiente, se procedió a leer las absorbancias en el espectrofotocolorímetro a 580 nm (este corresponde al valor teórico). Previamente el aparato se ajustó a Absorbancia = 0 con        el blanco (tubo        nº 0); de esa forma sólo se mide el color producido por las proteínas, puesto que se resta el  color producido por los reactivos.        

Adicional a esto se realiza una curva para determinar la longitud de onda máxima de manera experimental a partir de la muestra patrón (albúmina), haciendo un barrido en el espectrofotómetro, obteniendo los datos consignados en la tabla 2.

Para determinar         la concentración de proteínas de la muestra problema se debe construir una curva patrón o de calibrado a partir de una  solución  patrón  (BSA) (2 mg/mL). La  concentración que tienen las muestras problema se determina        por interpolación de los        valores        de absorbancia        en la  curva patrón.

1. RESULTADOS

Tabla 2. Barrido del espectrofotómetro para hallar la longitud de onda máxima.

...