HPLC

Introducción

En el presente informe se determinara el contenido de cafeína en una muestra problema (té), a través del método de la Cromatografía Liquida De alta Resolución, Construyendo así una curva de calibración.

La cromatografía consiste en un conjunto de técnicas de análisis basadas en la separación de componentes de una mezcla para su posterior detección. Existen variadas técnicas cromatografica , pero en todas ellas hay una fase móvil, la cual consiste en un fluido (gas, líquido, o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra con un flujo constante de presión proporcionado por una bomba, hasta llegar al punto donde es introducida la muestra. Siguiendo el flujo de presión la lleva a una columna donde se encuentra la fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.

El fundamento principal de la separación de los analitos de una mezcla, es la diferencia del coeficiente de partición de los diversos componentes condicionados por la diferencia de polaridad entre ellos en la fase móvil.

Objetivos

• Conocer y manejar un equipo HPLC

• Construir una Curva de Calibración

• Determinar el Contenido de cafeína en una muestra problema.

Materiales, Reactivos y Equipos

Materiales

• Vaso Precipitado

• Matraz Aforado

• Mechero Bunsen

• Rejilla

• Trípode

• Pizeta

• Jeringa

• Filtro Hydrophilic PVDF de 0.45 µm

• Pipeta Volumétrica

Reactivos

• Té Lipton

• Té Hindú

• Agua destilada

• Solución de Cafeína ( 1000 ppm)

Equipos

• Cromatografo , Características :Fase Móvil CH3CN/H2O 15:85 ; Flujo 1.0 Ml/min ; Detector UV a 270nm , Columna Lichrisfer RP-100c18

Procedimiento Experimental

Resultados

Cantidad de cafeína en muestra de té Lipton = 496.295mg

Porcentaje de cafeína en muestra de té Lipton = 45.32%

Porcentaje de humedad en muestra de té Lipton = 11.45%

Cantidad de cafeína en muestra de té Hindú = 243.348mg

Porcentaje de cafeína en muestra de té Hindú = 21.83%

Porcentaje de humedad en muestra de té Hindú = 17.09%

Tabla Nº1: Curva de calibración.

Area Concentración [ppm]

88276 50

288881 120

720708 250

1112310 370

1594323 500

Gráfico Nº1: Curva de calibrado obtenida con HPLC.

Ecuación de la curva.

Area = 3344 x Concentración - 10195

Discusión y Conclusión

Claramente, el té presenta una cantidad significativa de cafeína, el cual puede variar dependiendo de su marca y/o calidad. En este caso se analizaron 2 muestras, un té Lipton de "mejor" calidad que el otro té Hindú. La tendencia implicó que el té con sabor natural presentaba mayor cafeína, que el té con sabor a durazno, lo cual pudo haberse producido porque el té Hindú, al tener tiene ingredientes relacionados con saborizantes, éstos implican en una disminución de otros ingredientes, como en este caso, la cafeína.

Al comparar directamente ambos té, la marca LIPTON, con respecto a HINDÚ, tiene más del doble de cafeína, lo que implica en una cantidad importante respecto una de otra, 21% en contra de 45%. Queda claro que al gusto del consumidor vendrá la elección a la hora de elegir entre uno y otro, pero como opinión personal, al considerarse la cafeína como adictiva, lo mejor es siempre tomar té con bajas cantidades de este componente.

La técnica utilizada para la cuantificación de cafeína presenta una gran exactitud, y simpleza a la hora de la aplicación. Los resultados son muy concordantes, incluyendo siempre los factores de error humano e instrumental. También se ha podido producir algún error sistemático que se podría haber producido debido a una mala técnica extractiva o un error en la inyectada, en los que se podría haber minimizado

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