LABORATORIO DE INSEMINACIÓN ARTIFICIAL ORDEN Y ASEO EN EL LABORATORIO

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

LABORATORIO DE INSEMINACIÓN ARTIFICIAL

ORDEN Y ASEO EN EL LABORATORIO

El acceso al laboratorio debe ser restringido.

Las puertas de acceso se deben mantener siempre cerradas.

Antes de ingresar al laboratorio:

1. Es necesario cambiarse de overol, nunca deberá ir con la ropa propia del laboratorio a ningún lugar que no sea éste.

1. Se deberán desinfectar las manos con la solución desinfectante, que se encuentra en el dispensador ubicado en la puerta del laboratorio.

1. Usar todos los días un overol limpio.

En el laboratorio:

1. La principal norma de manejo del laboratorio de Inseminación Artificial es el orden y el aseo estricto; el orden se mantendrá con la finalidad de facilitar la rutina de trabajo y el aseo es con el objetivo de mantener el mayor status sanitario de esta instalación.

1. Tener presente que el material que se encuentra en el laboratorio es solo y exclusivamente para el procesamiento del semen, cualquier otro material u objeto que se requiera para el manejo de los machos deberá manejarse en el área de machos.

1. Los mesones de trabajo se mantendrán despejados de papeles u otros objetos, salvo los necesarios para el desarrollo del trabajo.

1. Todo material de vidrio (portaobjetos y cubreobjetos) utilizado debe dejarse en agua inmediatamente luego de ser usado para evitar la adherencia de fluidos seminales, antes de ser lavados, además, el material debe permanecer el menor tiempo posible sucio, para que no contamine el ambiente.

1. Siempre a primera hora de la mañana lo primero que hay que hacer es encender todos los equipos (baño de maría, horno y aire acondicionado) necesarios para el trabajo diario.

Al finalizar la jornada:

1. El encargado debe asear pisos, paredes, ventanas y lavaplatos.
2. Los mesones deben ser limpiados y desinfectados todos los días con alcohol antiséptico puro.
3. Botar la basura en la caneca externa diferenciándola en plástico, papel y vidrio, teniendo en cuenta que en el laboratorio no debe permanecer basura por más de un día.
4. Desenchufar implementos eléctricos.
5. Cubrir el microscopio con el forro.
6. Apagar todas las luces.
7. Cerrar la puerta con llave.

TOMA DE SEMEN

Con la información recibida de las hembras a servir en gestación, determinar el número de machos a los cuales se les hará extracción de semen.

Los machos a utilizar dependen de:

• Utilizar siempre las máximas dosis posibles por extracción.
• Utilización de los machos: machos jóvenes (se considera joven cuando es menor de 11 meses de edad), a estos machos se les hará toma cada 5 días; machos adultos (son aquellos machos mayores de 11 meses de edad), a estos machos se les hará una toma mínimo cada 3 días y como máximo cada 7 días.
• Cuando un macho presente cualquier clase de tratamiento o vacunación no se les hará toma antes de 7 días después del tratamiento o la vacunación; para la vacunación hay que rotar los machos.
• Si el macho se encuentra decaído o enfermo, no se le realizará toma y se le hará el seguimiento correspondiente (revisar si consumió su alimento, tomarle la temperatura, hacerle el tratamiento preestablecido en el manual de tratamientos en caso de necesitarlo y avisar al encargado).

Antes de ir a buscar el macho, el operario debe seguir el siguiente procedimiento:

• Lavarse ambas manos con agua potable y cepillo de uñas.
• Enjuagarse las manos con agua destilada.
• Secarse con una toalla de papel desechable.
• Colocarse primero un guante de vinilo (este no debe contener talco) y luego una manga de palpación en la mano con la cual va a realizar la extracción.
• El operario teniendo las manos lavadas y con sus respectivos guantes deberá llevar en su bolsillo suficientes toallas desechables para la limpieza del macho.
• Verificar el estado de la sala de toma de semen (limpia y seca) y dejar la puerta abierta y asegurada.
• El operario debe abrir la puerta del corral del macho y dando golpes suaves con la palma de la mano o bastón de mando sobre el dorso o el cuello dirigirlo hacia el pasillo y guiarlo hasta la sala de toma de semen. Al salir el macho de su corral se deberá cerrar de nuevo.
• En el pasillo evacuar el prepucio, asegurando que no queden residuos de orina, (masajear de atrás hacia adelante con la palma de la mano), secar con una toalla de papel y con las otras toallas limpiar el macho en los flancos, verificando que quede limpio y seco. Este procedimiento deberá realizarse de manera muy eficiente, ya que de él depende que no se contamine el semen con orina y/o impurezas, posteriormente llevarlo a la sala de toma de semen.
• Posteriormente ingresar el macho al corral de toma de semen, el cual se deberá dejar tranquilo para que haga el reconocimiento del lugar.
• En la ventana de transferencia entre el laboratorio y la sala de toma de semen habrán dos jarras de recolección que se mantendrán a una temperatura de 37°C, las cuales estarán destinadas así: una que siempre ingresara al laboratorio y en donde se hace la trasferencia de la bolsa US Bag, de la jarra que se utiliza para la toma de semen a la jarra que ingresa al laboratorio. Por ningún motivo la jarra de recolección de semen pasara al laboratorio y viceversa.

La jarra de recolección debe estar previamente preparada en la ventana de transferencia entre el laboratorio y la sala de toma de semen, la cual se encuentra preparada de la siguiente manera:

• Secar muy bien la jarra recolectora introducir en ella la bolsa US Bag, esta bolsa debe ser previamente abierta teniendo en cuenta que se debe separar el filtro, que lleva en su interior para permitir la entrada del semen, al realizar este procedimiento se debe tener mucho cuidado de no tocar el interior de la bolsa (no se puede tocar con las manos), esto para evitar contaminarla, asegurar los bordes de la bolsa US Bag en la parte superior de la jarra, por último cubrir con papel aluminio la boca de la jarra con la bolsa en su interior. Tener en cuenta que esta jarra nunca entra al laboratorio este proceso de colocación de la bolsa US Bag se realiza dentro de la ventana de transferencia.
• Una vez el macho monta en el potro, el operario debe ayudarlo desde la parte posterior a acomodarse en la posición correcta, la cual debe ser paralelo al potro, (si es necesario).
• Cuando el macho inicia movimientos de cadera de atrás hacia delante tomar la jarra de la ventana de transferencia y un termo auxiliar, dirigirse hacia el (la jarra de recolección debe estar antes en la ventana del lado del área de machos), momento en el cual desenvaina el pene.
• El operario debe tomar la jarra de recolección y el termo auxiliar y con la otra mano la que tiene el guante de látex, coger el pene (previamente se debe haber quitado la manga de palpación), dejando libre el extremo del mismo para permitir que el eyaculado salga libremente; dirigirlo hacia delante (nunca hacia abajo, sin doblar el pene), ejercer una presión suave y constante, simulando el cérvix de la cerda.
• En caso de tener alguna dificultad para sujetar el pene, limpiar bien la mano con una servilleta desechable, para retirar de ésta la sustancia lubricante del pene que puede hacer más difícil la sujeción.
• El macho estará listo para eyacular cuando tenga erección completa y cesen los movimientos de cadera. En éste mismo instante el operario debe quitar el papel aluminio que tapa la jarra en el cual se encuentra la bolsa de recolección.
• Antes de iniciar la eyaculación, el operario debe dirigir la jarra hacia la punta del pene; de tal forma que recolecte todo el eyaculado del macho. Se deben desechar los primeros chorros del eyaculado en un termo auxiliar que permanece en la sala de toma.
• El operario debe tener mucha paciencia, NUNCA soltar el pene hasta no estar completamente seguro de que el macho finalizó la eyaculación. Ésta termina cuando sale la última fracción pobre, el pene presenta movimientos más fuertes, pierde la erección y comienza la retracción; en este momento el operario debe soltar el pene.
• Desprender el filtro de la bolsa que se encuentra ubicada en la jarra de recolección y tirarla al basurero; una vez retirado el filtro se envolverá la bolsa dentro de la jarra quedando tapado por completo el eyaculado (esto ayudará que el semen no sea contaminado).
• La jarra que contiene el eyaculado, se colocará en la ventana de transferencia.
• El operario luego de realizar la toma le dará la instrucción al operario del galpón, para llevar el macho a su corral correspondiente.
• Anotar esta toma en el registro de utilización del macho y en la tarjeta de control de machos que se encuentra ubicada en la cuerda en la parte superior del corral.
• La bolsa que contiene el semen recolectado se transferirá en la ventana de transferencia a la jarra de recolección que pasará al laboratorio. Ya en él, la bolsa con la fracción rica se transfiere a una nueva jarra y se sacará una pequeña porción de semen en un vaso pequeño desechable para la posterior evaluación.
• Colocar inmediatamente el eyaculado dentro del horno previamente controlado a 37°C, para evitar que se enfríe.

EVALUACIÓN DEL SEMEN

Tener presente que mientras se esté trabajando con el semen (dilución, preparación de dosis, análisis), deberá usar el tapabocas y gorro, para evitar al máximo la posible contaminación del semen.

• Volumen: para medir el volumen del semen colocar la jarra con la bolsa US Bag que contiene el eyaculado sobre la báscula previamente tarada con el peso de la jarra, una vez se registre el peso que es el número que aparece en el lector, se le resta el peso de la bolsa US Bag y el resultado equivale al volumen del eyaculado del macho. Anotarlo en el registro correspondiente.
• Luego de tener el volumen se hace dilución uno a uno con el diluyente, esto es, adicionar al semen una cantidad igual de diluyente, teniendo la precaución de mezclarlos a la misma temperatura, para lo cual se tomará la temperatura con el termómetro infrarrojo, primero al semen y luego al diluyente.
• En adelante tanto el semen como el diluyente se dejan por fuera del horno y baño maría respectivamente.
• Color: observar el color en el eyaculado y anotar en el registro correspondiente lo observado, son colores normales del semen blanco lechoso o cremoso, así como los colores anormales (rosado, amarillo, café), indicativos de presencia de sangre o algún contaminante.

Luego el operario procederá a hacer la evaluación microscópica de la siguiente manera:

• Motilidad: el operario debe tomar un portaobjetos ubicado en el horno a una temperatura de 37°C; (antes de colocar la gota en el portaobjetos se deberá agitar el eyaculado, realizándolo suavemente con movimientos de la bolsa, con el fin de que la gota de semen que se tome sea homogénea con el resto de la muestra) con la pipeta colocar una gota de semen en el portaobjetos y cubrirla con un cubreobjetos que debe estar igualmente a 37°C. Llevar la muestra inmediatamente al microscopio y enfocar con el lente de 10X.

En la evaluación de motilidad debe tenerse en cuenta:

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