Propiedades De Las Enzimas

分光光度法を知る

(CONOCIENDO LA ESPECTROFOTOMETRÍA)

JOSÉ A. BARRAZA, PABLO SEPÚLVEDA, FRANCO VEGA.

CONTACTO:JBARRAZA9@ALUMNOSULS.CL,PSEPULVEDA2@ALUMNOSULS.CL,FVEGA4@ALUMNOSULS.CL

RESUMEN

El primer laboratorio de bioquímica trata sobre la electro fotometría de absorción molecular, mediante la realización de un barrido de longitudes de onda cuyo objetivo es determinar el espectro de absorción del permanganato de potasio; para poner en practica esto se usó una solución de Permanganato de potasio (KMnO4) al a 0,2g/L. El barrido de longitudes de onda automático se ejecuta un espectrofotómetro de doble haz, en el que se sitúa la cubeta con el blanco en una de sus celdas de medida y la cubeta con la sustancia problema en la otra de sus celdas. Se evaluará espectro de absorción del permanganato de potasio y la Curva de calibración del permanganato de potasio mediante un espectrofotómetro, se tabularan los datos en una tabla para su posterior interpretación y demostración de la ley de Lambert y Beer en el gráfico de la curva de calibración.

Palabras claves: Espectrofotometría, Permanganato de potasio, Curva de calibración, Longitud de onda, Transmitancia, Absorbancia, Ley de Lambert-Beer, Espectro electromagnético, Haz luminoso.

INTRODUCCION

En el siguiente informe se darán a conocer los resultados obtenidos en la primera experiencia del laboratorio de bioquímica, su principal objetivo fue determinar el espectro de absorción del permanganato de potasio, dando a conocer los métodos que fueron usados para luego poder ser ordenados, tabulados y analizados con sus respectivos fundamentos de los datos resultantes, para comprobar de esa manera la Ley de Lambert y Beer.

Para poder hacer una medición del espectro de absorción se ha utilizado un espectrofotómetro, cuya función es medir la absorbancia (la cantidad de luz que se retiene una determinada muestra problema ya que la luz al atravesar una muestra la intensidad inicial resulta distinta a la inicial ya que esta muestra absorbe una parte de esa energía). Se utilizan diferentes longitudes de onda (λ) (desde 400 hasta 700 con intervalos de 5 en 5) que pasan por la muestra lo que se busca es encontrar la λ en que la absorbancia sea mayor, indicando de esa manera que en esa longitud de onda especifica la muestra absorbe la mayor cantidad de energía a través de un barrido de longitudes de onda representado en un gráfico.

Cuando ya se tiene conocimiento de la longitud de onda óptima se mide la absorbancia en las diferentes concentraciones que se encuentra el permanganato de potasio en los diferentes tubos de ensayo para poder determinar la relación existente entre estas variables a través de una curva de calibración y el posterior análisis de esta.

Una vez realizados los experimentos correspondientes se obtuvieron una serie de resultados que satisfacían nuestras expectativas, si bien en un comienzo los resultados obtenidos causaban cierta inseguridad en los procedimientos al correr del tiempo fueron los mismos resultados los que comprobaron la veracidad del experimento. Según la ley de Lambert y Beer, la absorbancia toma valores que van desde 0 a 1, por lo que en el primer experimento, realizamos un barrido de longitudes de onda en una solución de agua destilada con permanganato de potasio, con el fin de encontrar la absorbancia del mismo a distintas longitudes de onda (se tomaron los datos desde 400 a 700 nanómetros), obteniendo en todos los casos, cifras menores a 1, y demostrando que se cumple la ley de Lambert – Beer.

OBJETIVOS:

-Determinar el espectro de absorción del Permanganato de Potasio (KMnO4).

-Lograr identificar los distintos valores de la absorbancia en las muestras a diferentes longitudes de onda.

-Representar esquemáticamente los valores obtenidos, para así identificar claramente el punto óptimo de esta sustancia.

-Aplicar la espectrofotometría visible y ultravioleta.

MATERIALES Y METODOS

Procedimiento n° 1

MATERIALES

-Matraz aforado de 100 ml de capacidad

-Pipetas Pasteur 10 ml

-Cubetas espectrofotómetro

-Espectrofotómetro

- Lápiz

-Cuaderno

REACTIVOS

-Agua destilada

-Solución de Permanganato de Potasio (KMnO4 0,2 g/L)

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1.- Verter 3ml de agua destilada en una cubeta espectrofotómetro.

2.- En otra cubeta vierta 4ml de permanganato de potasio diluido.

3.- Realizar el ajuste pertinente al espectrofotómetro para que el haz de luz sea de 400nm.

4.- Situar la cubeta con agua destilada en la primera celda del espectrofotómetro, posteriormente la que contiene el permanganato de potasio en la segunda rendija y realizar la medida de absorbancia generada por las longitudes de onda ya seleccionadas anteriormente.

5.- Apuntar los resultados obtenidos de la absorbancia (A) y del porcentaje de transmitancia (T).

6.- Repetir el proceso progresivamente con un intervalo de longitud de onda (λ) de cinco en cinco, hasta alcanzar los 700nm.

Figura.-1

Figura.-2

RESULTADOS

Luego de agrupar los valores obtenidos en una tabla y graficarlos posteriormente se visualiza que el punto óptimo de la absorbancia de este compuesto es a los 530nm y la absorbancia alternativa se encuentra a los 550nm. En la absorbancia óptima el resultado del experimento es 100% libre de interferencia, pero en el caso de que en la solución óptima haya algún factor interferente, se puede usar el resultado de la absorbancia alternativa. Ésta última se debe a una inestabilidad de la absorbancia del compuesto.

Tabla N°1.

Lamda (λ) Absorbancia(A)

400 0,079

415 0,048

430 0,037

445 0,05

460 0,092

475 0,173

490 0,313

505 0,484

520 0,57

535 0,607

550 0,656

565 0,377

580 0,229

595 0,077

610 0,061

625 0,05

640 0,044

655 0,036

670 0,027

685 0,02

700 0,013

Grafico N°1. Curva espectral del permanganato de potasio (KMnO4)

Figura.-3

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