Reconocimiento de proteínas

TRABAJO DE LABORATORIO
DE BIOTECNOLOGÍA

RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS

[pic 1]

Carriqueo P. Y Garcia A.

Goicoechea Malvina

5.º año, E.S.R.N. N°58

Resumen

La experiencia de laboratorio realizada por los alumnos de quinto año, consistió acerca del reconocimiento de proteínas  Dicha experimentación se basó principalmente de la proteína de origen animal ovoalbúmina (componente principal de la clara de huevo), en donde la misma se utilizó para producir la solución madre, la cual sirvió para realizar diferentes controles. Luego, estos últimos sufrieron varias alteraciones para lograr un proceso de desnaturalización  por la acción de calor, la cual produce su desorden y la  destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria. Esta reacciona a diferentes pruebas de reconocimiento, como lo es el reactivo de biuret (colocado anteriormente en las mezclas). Por este motivo, uno de los controles tomó un color violeta dando esta prueba como positiva la cual  detecta la presencia de compuestos de tres o más enlaces peptídicos. Por otro lado, el control restante al ser calentado cambió su color y  textura, lo quiere decir que la prueba dio negativa, por lo tanto perdió su estructura.

Palabras Claves; Proteínas, ovoalbúmina, desnaturalización, biuret, peptídicos

Abstract

The laboratory experience carried out by the fifth-year students consisted of the recognition of proteins. This experimentation was based mainly on the protein of animal origin ovalbumin (the main component of egg white), where it was obtained to produce the solution mother, which was assigned to perform different controls. Then, the latter underwent various alterations to achieve a process of denaturation by the action of heat, which produced their disorder and the destruction of their tertiary and quaternary structure. This reacts to different recognition tests, such as the biuret reagent (previously placed in the mixtures). For this reason, one of the controls took on a violet color, giving this test a positive which detects the presence of compounds with three or more peptide bonds. On the other hand, the remaining control, when heated, changed its color and texture, which means that the test was negative, therefore it lost its structure.

Keywords: Proteins, ovalbumin, denaturation, biuret, peptides

Objetivos

• Identificar la presencia de proteínas por medio de la reacción de Biuret
• Determinar la pérdida de estructura secundaria, terciaria y/o cuaternaria
• Comprobar los enlaces peptídicos

Introducción

Si en una disolución de proteínas se producen cambios de pH, o variaciones bruscas de temperatura, las estructuras secundaria, terciaria o cuaternario se pueden llegar a perder debido a que hay una alteración de las interacciones entre los grupos R que la estabilizan, en el caso de que esto suceda, también se pierde la función de la proteína. Esta alteración se denomina desnaturalización. (guia de laboratorio)

En el laboratorio se realizaron 2 pruebas para determinar si la clara del huevo pierde sus proteínas al pasar por la homogeneización con agua dilatada y luego por el cambio de temperatura. Es importante resaltar que esta alteración sucede en nuestra vida cotidiana cuando cocinamos un huevo ya sea hervido o frito.

Modelo teórico

Las proteínas están compuestas por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, estas son moléculas formada por aminoácidos que están unidos por un tipo de enlaces conocidos como enlaces peptídicos. Cada aminoácido está formado por un átomo de carbono central, al que está unido al grupo amino, un grupo carboxilo, un átomo de hidrógeno y una cadena lateral R específica para cada aminoácido. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la combinación requerida de aminoácidos por la instrucción genética. El orden y la disposición de los aminoácidos dependen del código genético de cada persona. Las proteínas se pueden encontrar en cada célula del cuerpo humano o de cualquier ser vivo.

Las hipótesis son las siguientes:

• Los controles se pueden teñir de violeta indicando que hay enlaces peptídicos, por lo tanto hay proteínas
• Los controles pueden cambiar de color y textura indicando que el contenido se ha desnaturalizado.
• Los controles se pondran negros indicando que no hay presencia de proteinas

Materiales:

• Material biológico: huevo de gallina
• Agua destilada
• Reactivo de Biuret
• vaso de precipitado
• varilla de vidrio
• probeta
• propipeta
• pipeta
• gotero
• algodón
• colador
• Mechero
• pinzas de maderas
• Termómetro
• Tubos de ensayo

Descripción del procedimiento:

1. Establezca el probando y los controles.
2. Deposite en un vaso la clara de huevo (ovoalbúmina)[pic 2]

(Antes de depositar la clara en el vaso de precipitados se midió la cantidad de clara extraída)

1. Diluirla con igual proporción de agua dilatada, homogenice con varilla de de vidrio y filtre el otro recipiente (esta será la solución madre)

[pic 3][pic 4]

(se comprobó la misma cantidad de agua destilada y la clara de huevo y luego se homogeneizó)

[pic 5]

(Se filtra el contenido para obtener la solución madre.)

1. Tome un 5ml de la solución madre, adicione 3 gotas del reactivo de biuret
2. Tome 1 ml de la solución madre, adicionar 4 ml de agua destilada (dilución 1/5) y luego adicione 3 gotas del reactivo del biuret ,
3. Tome un tercer y cuarto tubo, agregue 5 ml de cada control y adicione 3 gotas del reactivo de biuret.
4. En los tubos de ensayo agregue 3 gotas de solución de biuret. Observe la coloración que presentan. Si los resultados no fueran los esperados, caliente los tubos a baño María a 37°C durante 15 minutos

 [pic 6]

se calienta a baño María los controles.

1. Finalmente el tubo de (5/0) terminó con 21 gotas de biuret y el tubo de (4/1) culminó con 12 gotas de biuret

Resultados y análisis

[pic 11][pic 12][pic 9][pic 10]

En las imágenes se observa cómo cambio el color de acuerdo a la primera foto de lado izquierdo en comparación con la última de lado derecho, para este cambio se necesitaron más gotas de biuret de las mencionadas en la guia de laboratorio, tendría que ver que la sustancia al momento de utilizarla estaba vencida. por lo tanto recién funcionó su reacción al calentarla.

Por otro lado cabe aclarar que  los pasos 1, 2, y 3 se realizaron nuevamente en un principio, ya que la sustancia obtenida no filtraba debido a que no se había homogeneizado bien la mezcla. cuando se prepara nuevamente la sustancia está, si filtro y fue la utilizada para todo los pasos siguientes.

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