SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS[pic 1][pic 2]

LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS

PRÁCTICA:

SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA

PROFESORA:

GABRIELA E. OLGUIN RUIZ

ALUMNA:

DIANA PAOLA LÓPEZ ROMERO

GRUPO: 4IV2 

SECCION: 1

FUNDAMENTO:

Para poder explicar la cromatografía bidimensional o bidireccional, es necesario tomar en cuenta el concepto base de ésta:

Cromatografía: Método de separación analítico o preparativo en el que los componentes de una mezcla (solutos) se separan por su distribución diferencial a través de un medio poroso (fase estacionaria), la cual es ocasionada por el flujo de un disolvente (fase móvil).

Por ende la cromatografía (unidimensional) nos permite separar componentes en una mezcla, cuando éstos son pocos, pero, en la mayoría de los casos se requiere la separación de una mezcla con diversos componentes y es ahí cuando se necesita de una cromatografía bidimensional.

Tenemos entonces que, una mezcla compleja que no se separa por completo en un solo cromatograma, puede resolverse mediante cromatografía bidimensional. En esta técnica, la muestra se aplica en una sola esquina del papel figura a), el cromatograma se corre en forma paralela a uno de los bordes del papel. Luego de que el cromatograma está completo y el papel seco, se tiene que rotar 90° y se realiza una cromatografía paralela al segundo borde (utilizando otro tipo de disolvente / fase móvil). Figura b) y c)

[pic 3]   [pic 4]     [pic 5]

Dado que cada compuesto migra a una velocidad distinta en base a la afinidad que tenga con la fase estacionaria, es decir mientas más afín a la fase estacionaria menos se moverá, la segunda cromatografía debe incrementar en grado sustancial la separación de la mezcla en sus componentes.

[pic 6]

OBJETIVOS:

• Separar loa aminoácidos presentes en el jugo de naranja por cromatografía bidimensional en capa fina
• Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos
• Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional

RESULTADOS:

Representación esquemática de los cromatogramas

A continuación se muestran la placa 1 y 2 respectivamente; la placa uno es unidimensional, la placa 2 es dimensional

A continuación se muestran la placa 3 y 4 respectivamente; ambas placas son dimensionales, la placa 3 solo contiene a los 10 aminoácidos trabajados, la placa 4 solo contiene a la muestra de jugo (naranja)

Calculo de los valores de Rf

[pic 11]

1. Determinar los valores de Rf de cada aminoácido en los cromatogramas unidimensionales y enlistarlos en orden creciente de Rf en la 1ra fase móvil.

Tabla 1: cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles

...