Reacciones de identificacion de proteinas.

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Objetivo:

Al término de esta práctica, el alumno deberá ser capaz de describir algunas de las técnicas de detección cualitativa de proteínas en base a los componentes de su estructura.

Prerrequisitos:

Proteínas: Las proteínas son los instrumentos moleculares mediantes los que se expresa la información genética que consiste de aminoácidos unidos en una cadena larga. Esta puede desarrollar diferentes funciones dependiendo de su estructura.

Enlace peptídico: Es una de las interacciones más importantes en toda la bioquímica, se trata de la unión que se establece entre dos aminoácidos la cual es provocada al unirse el grupo amino de uno de los aminoácidos y el grupo carboxilo de otro.

Estructuras de las proteínas:

Estructura primaria: Esta determinada genéticamente y establece la estructura 3D de la proteína.  Es la secuencia de todos los constituyentes hasta el final de la cadena donde se sitúa un carboxilo.

Estructura secundaria: Se refieren a disposiciones estables de aminoácidos continuos en la cadena, o sea, la manera en que esta se encuentra plegada debido a la formación de puentes de hidrogeno. En estas particularmente existe una subdivisión en la que se encuentran las repetitivas y no repetitivas.

1. Repetitivas: Incluye las hélices alfa y láminas beta.

• Hélices alfa: Se refiere al esqueleto polipeptídico enrolladlo sobre si mismo, en estas hélices las cadenas R sobresalen y se encuentran estabilizadas por puentes de hidrogeno.
• Hélices beta: El esqueleto peptídico está extendido en forma de zigzag de manera que las cadenas R sobresalen de forma alternada y es estabilizada por puentes de hidrogeno.

1. No repetitivas: Giros o asas

• Giros: Son los que se encargan de comunicar dos regiones repetitivas.

Estructura terciaria: Es la estructura tridimensional global que adoptan sus componentes, y se dividen en proteínas fibrosas y globulares según la apariencia que esta posea en base a su acomodación.

1. Fibrosas: Tienen una estructura terciaria simple, con una hélice súper enrollada en a-queratina y colágeno.
2. Globulares: Tienen estructuras secundarias plegadas muy compactas y casi solidas con cadenas laterales hidrofóbicas escondidas.

Estructura cuaternaria: Algunas proteínas están constituidas por dos o más cadenas polipeptídicas o subunidades, que pueden ser idénticas o diferentes. La disposición de  estas subunidades proteicas en complejos tridimensionales es la estructura cuaternaria.

Introducción:

Es imprescindible en el área de la bioquímica saber manejar adecuadamente las proteínas y para esto es necesario conocerlas con detalle. La función que una proteína en particular asume es, en muchos casos, directamente relacionada con la estructura que posee (Murray et al., 2009). Cuando queremos conocerlas detalladamente es necesario separar una del resto de las demás y disponer de técnicas que permitan determinar sus propiedades (Cox et al., 2005). A partir de proteínas puras, podemos determinar secuencias de aminoácidos y las relaciones evolutivas entre las proteínas en diversos organismos y podemos investigar la función bioquímica de una proteína (Stryer et al., 2002). Algunos métodos modernos adicionales, tales como el clonaje de DNA y la secuenciación de genomas, pueden simplificar el proceso de la purificación (Díaz et al., 2007). En el caso de análisis cualitativo, es fácil hacer inferencias sobre la identidad de la proteína, siendo un método de gran ayuda.

• Murray R. K.,  Bender D. A., Botham K. A., Kenelly P. J., V. Rodwell W., Weil P. A. 2009. Estructura y funciones de proteínas y enzimas.  Harper. Bioquímica.  McGraw Hill.  28ª edición. México.  27-29
• Nelson L., Cox M. 2005. Aminoácidos, péptidos y proteínas. Principios de bioquímica Lehninger. Omega. 4ta edición. Barcelona. 85-87
• Stryer L., Berg J. M., Tymoczko J. L. 2002. Explorando las proteínas. Bioquímica. W. H. Freeman. 5ª  edición. Estados Unidos. 138-141.
• Diaz J., Juárez M. C. 2007. Purificación de proteínas. Bioquímica.  McGraw Hill. 1ª edición.  México. 83-87

Materiales:

Métodos:

Experimento #1.

Reacción de Biuret.

1. Preparar los tubos de ensaye de la manera en que se indica en la tabla 1 “Serie de tubos reacción de Biuret”. Llevando el procedimiento de manera cautelosa marcando cada uno de los tubos según corresponda con su contenido.
2. Agitar los tubos una vez que hayan sido preparados con las sustancias indicadas y déjelos reposar durante 15 minutos.
3. Observar su coloración y como es su intensidad.

1. Registrar los datos obtenidos de la siguiente forma; (+++)=violeta intenso, (++)=violeta moderado, (+)=violeta ligero y (-)=sin coloración violeta.

Tabla 1. Serie de tubos reacción de Biuret.

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