Dilución Seriada

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

DILUCIONES SERIADAS Y DIFUSIÓN EN PLACA

Ing. Ana Cunachi-Karen Hidalgo

Andrés Benjamín Garcés Cifuentes

Universidad Técnica de Ambato

Facultad de Ciencias e Ingeniería en Alimentos

Carrera de Ingeniería Bioquímica

Laboratorio de Microbiología de los Alimentos I

d.benjamin194@hotmail.com

Ingahurco – Argentina y EE.UU

Ambato – Ecuador

TEMA:

Los medios de cultivo son el mejor comienzo para el estudio de microorganismos en un ambiente controlado que proporciona todas las oportunidades imaginables. El primer paso es la preparación del cultivo, empezamos por diluciones seriadas.

1. INTRODUCCIÓN

Una característica importante de las células es su capacidad para llevar a cabo reacciones químicas y organizar sus moléculas para formar estructuras específicas. La expresión final de esta organización es el crecimiento (replicación).

Los medios de cultivo son las soluciones nutritivas que se usan en el laboratorio para el cultivo de los microorganismos. En microbiología se usan dos tipos generales de medios de cultivo: los químicamente definidos y los complejos (o no definidos). Los medios definidos se preparan añadiendo cantidades precisas de compuestos orgánicos o inorgánicos purificados a un volumen en agua destilada. Por tanto se sabe que la composición química exacta de un medio definido. Sin embargo en muchos casos la composición exacta de un medio no es importante. Los únicos medios complejos pueden ser entonces adecuados o incluso ventajosos por varias razones. A menudo los medios complejos emplean hidrolizados de caseína (proteína de leche), carne, soja, levaduras u otras sustancias nutritivas (sin embargo no definidas químicamente). Tales hidrolizados están disponibles comercialmente en forma de polvo y pueden ser pesados con f facilidad y disueltos en agua destilada para preparar un medio. No obstante una limitación al usar un medio complejo es que no se puede controlar su composición nutritiva exacta.

Los medios de cultivo se preparan con frecuencia en forma semisólida o sólida mediante la adición al medio líquido de un agente solidificante. Los medios solidos inmovilizan las células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Estas pueden ser de forma y tamaño variable dependiendo del organismo, condiciones del cultivo, suministro de nutrientes y otros parámetros físicos. Dado que los microorganismos son ubicuos, los medios de cultivo deben ser esterilizados antes de usarse. Para la mayoría de los medios de cultivo esto se realiza por calor, habitualmente calor húmedo en un gran recipiente a presión llamado autoclave. (Madigan, 2004)

Una vez preparado un medio de cultivo estéril, puede recibir un inóculo de un cultivo puro y cultivarlo nuevamente. Esto requiere el uso de la técnica aséptica. La que consite en una serie de procedimientos que evitan la contaminación durante la manipulación del os cultivos y de los medios de cultivo estériles. Su aprendizaje es esencial para tener éxito en el laboratorio de microbiología y representa uno de los primetos métodos que tiene que dominar microbiólogo.

Cuando una solución es de uso corriente en un laboratorio, se suele preparar una solución madre o stock, que se encuentra en una concentración mayor de la que se utiliza. A partir de ésta, se realiza una dilución para preparar la solución a la concentración de uso. Este proceso se puede repetir cuantas veces sean necesarias. (UNQ, sf)

El número de colonias de bacterias que crecen en una placa de Petri en un momento dado depende de la concentración, y dado que muchas otras técnicas de diagnóstico implican contar físicamente el número de microorganismos o células en ciertas áreas impresas dentro de una rejilla (comparando las concentraciones de dos tipos de células o microorganismos en la muestra) o en cavidades de un volumen determinado (para concentraciones absolutas), la dilución puede ser útil para obtener resultados más manejables. (Aneja, 2005)

Basandonos en la importancia de la dilución y la necesidad de controlar la concentración de microorganismos en una muestra, se define al objetivo de la práctica como realizar diluciones seriadas con muestras líquidas para la preparación de un medio de cultivo sólido.

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