Determinación de Proteínas por el Método de Lowry

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Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Ingeniería Bioquímica

Laboratorio de Métodos de Análisis

5IV1

Reporte de Práctica No.1: “Determinación de Proteínas por el Método de Lowry”.

Rosales Sánchez Víctor Sebastián. 14/06/2022

Introducción

Los métodos más exactos en la determinación de la concentración de proteínas son probablemente aquellos en los que se emplea la hidrólisis ácida de la proteína, seguida de un análisis de aminoácidos. Si bien otros métodos son sensibles a la composición de aminoácidos presentes en una proteína, la concentración absoluta de proteínas no puede ser obtenida. El método de Lowry no es la excepción, pero este es moderadamente sensible y constante de proteína en proteína, y es tan usado que la estimación de proteínas por este método es completamente aceptable, siendo una alternativa para casi cualquier circunstancia.

El método de Lowry combina la reacción de Biuret (en donde los enlaces peptídicos, al menos 4, reaccionan con el cobre cúprico, formando un complejo proteico bajo condiciones alcalinas) con la reducción del reactivo fenólico de Folin-Ciocalteau (ácido fosfomolíbdico-fosfowolfrámico) por parte de los residuos de tirosina y triptófano presentes en el complejo proteico. La reacción resulta en una coloración azul fuerte, la cual depende de los residuos de aminoácidos mencionados anteriormente.

El color azul desarrollado se mide a 750 nm (para una sensibilidad elevada en concentraciones de proteína bajas) o a 500 nm (para una baja sensibilidad para una elevada concentración de proteínas). Sin embargo, la longitud de onda estandarizada es a 590 nm.

Debido a su sensibilidad y simplicidad, este método es utilizado ampliamente en la bioquímica de las proteínas.

Resultados para Albúmina

Curva de Calibración Albúmina por el Método de Lowry.

Tabla 1. Resultados obtenidos en la curva de calibración para la determinación de Albúmina por el Método de Lowry. Datos proporcionados por los docentes en clase.

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Gráfico 1. Curva de Calibración obtenida para la determinación de albúmina por el Método de Lowry.

Ecuación de la recta para la curva de calibración de albúmina por el método de Lowry.

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        En donde:

• y = A = Absorbancia obtenida con una longitud de onda de 590 nm.
• x = C = Cantidad de proteína (albúmina).
• m = pendiente = 2.128*10-3.
• b = ordenada al origen = 0.0298.

Análisis estadístico de la determinación de albúmina por el Método de Lowry.

        Ecuación para determinar la concentración de albúmina por el método de Lowry:

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Tabla 2. Cantidad de albúmina cuantificada por el método de Lowry a partir de la ecuación de la recta obtenida por medio de la curva de calibración. La cantidad esperada de albumina es de 75 μg (tubo No.3 de la curva de calibración).

        Resultados del Análisis Estadístico

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Tabla 3. Resultados del Análisis Estadístico en la cuantificación de albúmina por el Método de Lowry.

Efecto de sustancias no proteínicas en el método de Lowry.

Tabla 4. Efecto de sustancias no proteínicas en la cuantificación de albúmina por el Método de Lowry.

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