Microbiologia De Alimentos

“AÑO DE LA INVERSIÓN PARA EL DESARROLLO RURAL Y LA SEGURIDAD ALIMENTARIA”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Informe Nº 01

Bioquímica de las Enterobacteriaceae

CURSO : Microbiología de Alimentos

DOCENTE : McBlga. Dorothi Torres.

ALUMNO : Silva Sandoval Maycke

Piura, 23 de setiembre del 2013

INTRODUCCION

La familia enterobacteriaceae es el grupo más grande y heterogéneo de bacilos Gram negativos con importancia clínica. Se han descrito 40 géneros con más de 150 especies. Estos géneros se han clasificado según sus propiedades bioquímicas, estructura antigénica e hibridación y secuenciación de los ácidos nucleicos. A pesar de la complejidad de esta familia, menos de 20 especies son las responsables de más del 95 % de las infecciones. (Murray, P. 2006)

Estos organismos están formados por bacilos, cocobacilos, que pueden ser inmóviles o móviles por flagelos peritricios. Son catalasa positivos y oxidasa negativos (Prácticas de Microbiología)

Reconocen como hábitat ecológico el intestino de hombres y animales. Estas bacterias son eliminadas con las heces, por lo que suelen contaminar el agua y el suelo, los cuales actúan como piedra angular en la patogénesis de la enfermedad. Las enterobacterias se contagian mediante transmisión oro-fecal o por transmisión hídrico-fecal: por ejemplo, a través de agua y alimentos contaminados, manos sucias, prácticas sexuales de riesgo (ETS producidas por enterobacterias), moscas, vectores pasivos (como en el caso de la pulga y Yersinia pestis , etc. Además son organismos quimiorganótrofos, anaerobios facultativos de metabolismo fermentativo y no exigentes nutricionalmente, creciendo en medios de cultivo ordinarios. Son catalasa y nitratasa positivos y oxidasa negativos. (Olivas, 2004)

Las enterobacterias son organismos ubicuos, se encuentran de forma universal en el suelo, agua y la vegetación; y también en la flora intestinal normal de muchos animales, incluidos en el ser humano, como el 30 % al 35% de las septicemias, más del 70 % de las infecciones del aparato urinario y muchas infecciones intestinales. Algunos microorganismos como Salmonella typhi, Shigella, Yersinia pestis se asocian siempre a enfermedad, mientras que otros como Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis forman parte de la flora comensal normal y pueden producir infecciones oportunistas. Existe un tercer grupo de enterobacterias que normalmente son microorganismos comensales, pero se pueden convertir en patógenas cuando adquieren genes con factores de virulencia presentes en plásmidos, bacteriófagos o islas de patogenicidad como Escherichia coli asociada a gastroenteritis. (Murray, P. 2006)

El objetivo de la práctica fue comprobar a través de las diversas pruebas bioquímicas las características propias del grupo de las bacterias entéricas en el cultivo microbiano de Escherichia coli.

MATERIAL Y METODOS

Para el desarrollo de la presente práctica se requirió de un cultivo joven, utilizándose en este caso a la bacteria E. coli.

Se procedió a sembrar el M.O en cada uno de los medios para las respectivas pruebas bioquímicas, de la siguiente manera:

CUADRO 01: Procedimiento de Pruebas Bioquímicas

PRUEBAS BIOQUÍ-MICAS MEDIO DE CULTIVO MÉTODO DE SIEMBRA INCUBA-CIÓN LECTURA

1. Formación de H2S y fermentación de la glucosa y lactosa. Kliger o TSI Por picadura profunda y estrías en la superficie. 37ºC x 24 hrs

VIRAJE AMARILLO: fermentación de la lactosa en la parte superior (+)

VIRAJE AMARILLO: fermentación de la glucosa en el fondo (+)

ENNEGRECIMIENTO: H2S (+) (superficie y base)

PRODUCCIÓN DE GAS: ruptura del medio.

2. Reacción de la oxidasa. Agar nutritivo Inocular una asada. 30ºC x 24 hrs

Oxidasa (+) = Púrpura azulada

3. Reducción de nitratos Caldo Nitrato

Mediante asada sembrar la cepa en estudio.

30ºC x 24 hrs Nitritos (+) = color rosado o rojo.

4. Prueba de la tolerancia al KCN 0.1 ml de KCN a CN Inocular tres asadas. 37ºC x 48 hrs

(+): Disco blanco neto en superficie.

5. Transformación de la Fenil alanina en ácido fenil pirúvico Agar fenil alanina Inocular los tubos 35-37ºC x 24 - 24 hrs

(+): Desarrollo de un color verde.

6. Investigación de β - galactosidasa En A/N Realizar suspensión densa del cultivo, agregando 0.25ml de SS, 1 gota de tolueno y 0.25ml de ONPG al 0.6% B.M. a 37 °C x 20 min. A 24 hrs (+): Coloración amarillo estable.

7. Hidrólisis de la úrea. Caldo úrea

Inocular una asada de M.O. sobre caldo úrea.

37ºC x 24 hrs (+): viraje al color rojo grosella.

8. Motilidad Medio SIM Sembrar con filamento a 5 mm de la superficie. 37ºC x 24 - 48 hrs

(+): desarrollo semejante a una nebulosa que se extiende hacia la parte inferior.

9. Ataque a la arginina Caldo de arginina y medio testigo Inocular tubos 35-37ºC x 24 - 48 hrs (+): Color púrpura en medio Taylor y amarillo en el testigo.

10. Ataque a la salicina Agar salicina con PBC Puntura profunda 35-37ºC x 24 - 48 hrs (+): Color amarillo.

11. Asimilación del malonato Caldo de malonato Estrías sólo en la superficie. 35-37ºC x 24 - 48 hrs (+): viraje del color verde del medio a azul marino.

12. Descarboxilación de lisina.

Medio LIA Por picadura profunda (sin tocar fondo) y estrías en la superficie 37ºC x 24 hrs (+): coloración púrpura.

13. Aglutinación con suero polivalente A=Cepa patrón, B=cepa a examinar, C=gota de solución salina Sobre un portaobjetos 3 gotas separadas de suero polivalente Salmonella y marcar A, B y C. (+): Aglutinación en A y B y no aglutinación en C.

14. Diferenciación de coliformes. Medio MR-VP

Inocular una asada del M.O.

Dividir el medio en 2 tubos y agregar a uno de ellos, rojo de metilo.

Realizar una coloración gram.

37ºC x 48 hrs (+): Color rosado o rojo.

CUADRO 02: Procedimiento para Coliformes

PRUEBAS MEDIO DE CULTIVO MÉTODO DE SIEMBRA INCUBA-CIÓN LECTURA

1. Asimilación del citrato. Cepa de un medio sólido Trazar una línea central en superficie. 35 - 37ºC x 24 hrs (+): Viraje de color verde a azul marino.

2. Formación del Indol. Cepa en el caldo Azada de cepa en caldo. Luego de incubación

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