Procesamiento de Técnicas Histologícas.

Objetivo General

Se llevará a cabo el procesamiento de una muestra Histológica (a deshidratación, aclaración, infiltración para que sea firme y llevar a cabo posteriormente la microtomía, tinción y montaje) a partir de un órgano previamente fijado, con el fin de obtener una laminilla.

Conocer las diferentes concentraciones de un agente deshidratante.

Conocer el funcionamiento de un agente aclarante.

Llevar a cabo una correcta inclusión en parafina.

Comprender las causas de artefactos.

Comprender las diferencias entre un órgano incluido y otro no.

Analizar la importancia de cada paso del procesamiento para obtener una buena laminilla

Realizar una tinción de una muestra incluida en parafina acuerdo a las propiedades del órgano.

Introducción

En este trabajo se realizará el procesamiento de una muestra histológica deshidratación, aclaración, infiltración, inclusión, microtomía, tinción y montaje a partir de un órgano previamente fijado, para esto es necesario tomar diferentes consideraciones, para que el proceso sea llevado adecuadamente.

Deshidratación

El proceso de deshidratación consiste en remover al máximo el agua contenida dentro de los tejidos de la muestra previamente fijados y endurecidos. La deshidratación tiene una acción de lavado y en ocasiones hace el material firme, posiblemente duro y quebradizo.

El agente deshidratante más comúnmente usado es el alcohol etílico, utilizadas en las series deshidratantes pueden ser elaboradas a partir del alcohol al 95% con agua destilada, a partir de este se prepara las concentraciones 30. 50, 70 y 85 por volumen y tomar el alcohol al 100% como la final.

Es recomendable empezar la deshidratación con una solución que tenga aproximadamente la misma concentración de agua que contenía el fijador.

Aclaración

El término ¨aclarador¨ empleado en estos reactivos es debido a que algunos solventes de la parafina hacen a los tejidos traslúcidos. La acción aclarante es secundaria , su principal función es servir como solvente de la parafina. Los solventes más comunes son el xileno (comercialmente conocido como xilol) y cloroformo. El xileno es económico, por lo que es el más utilizado.

Infiltración/ Inclusión

Debe proceder al corte, porque muy pocos tejidos son lo suficientemente rígidos por sí mismos como para poder cortarlos en secciones delgadas, es decir del orden de unas cuantas micras, sin soporte o sostén adicional.

La infiltración/ inclusión es la operación mediante la cual se penetra un material solidificable a un tejido deshidratado o no, con el propósito de proporcionarle firmeza; de esta forma se le estará facilitando la elaboración de cortes y obtención de secciones delgadas y uniformes. Un material de infiltración/inclusión ampliamente utilizado es la parafina, ya que al mismo tiempo que da soporte a los tejidos, no reaccionan químicamente con ellos por lo que no se provocan cambios en los mismos.

Microtomía

Para el corte de un bloque de parafina se ocupa el equipo llamado microto, es un sistema constituido principalmente porun soporte para el bloque y una cuchilla filosa capaz de cortar muestras lo suficientemente delgadas; el grueso del corte depende del tipo de micrótomo que se utilice ya que existen diferentes como : micrótomo de oscilación, de rotación o Minot(4.7 •m), de deslizamiento81-25 •m, de mano(20•m), de congelación (30-80 •m) y ultramicrotomo. De acuerdo al artículo Tecnicas histologías de César Montalvo, para la obtención de un corte uniforme y delgado se toman en cuenta dos aspectos importantes: “a) Que la deshidratación, impregnación e inclusión hayan sido realizadas correctamente.

b) El empleo de una navaja o cuchilla muy bien afilada y asentada y que el filo de la misma ofrezca la inclinación adecuada hacia la superficie del bloque”.

Una vez obtenido el corte del bloque se procede a realizar una tinción, con el objetivo de observar con mayor facilidad estructuras específicas. El procedimiento de coloración o tinción consiste en que una estructura celular o tisular adquiere un color gracias a la acción de una sustancia llamada colorante. En algunos casos estas sustancias están acompañadas de otros grupo que le dan intensidad a la coloración gracias a su estructura química, llamados auxócromos. Dependiendo de lo que se desee observar será el colorante y la técnica de tinción que se utilizará. De acuerdo al libro Técnicos especialista en laboratorio por José Bermejo y Carmen Silvia obtenemos la siguiente clasificación

Directa o sustantiva.

Indirecta o adjetiva. de hematoxilina requieren de un mordiente para que aquella proporcione color.

Progresiva.

Simple.

Compuesta o combinada.

Simultánea

Sucesiva

Ortocromática.

Metacromática.

Por último, lo que se debe realizar y que se pretende hacer en esta práctica es el montaje de la laminilla para que esta se conserve; este paso consiste en deshidratar nuevamente, aclarar y fijar la muestra al portaobjetivos y cubreobjetos con ayuda de una resina.

Resultados

Tabla 1. Diferencias entre riñón fijado y extraído directamente.

Muestra

Diferencias antes/después de deshidratación y aclaramiento

características del órgano

observaciones de la fijación

Apariencia seco, sin tanto brillo, se observan las cavidades despejadas

Color: Más oscuro, café rojizo.

Textura: consistente

Observaciones: Grasa cristalizada, las estructuras están más claras y definidas

Aparentemente se conser-varon las estructuras del riñón. No se observan tejido o partes dañadas o destruidas. Las partes se observan más claras y

detalladas, no se distingue crecimiento de microorga-nismos.

Apariencia: Hinchado, brilloso, sin cavidades.

Color: Rojo-pardo

Textura: Liso, resbaloso y semiduro.

Observaciones: Rodeado de grasa, forma de frijol.

Tabla 2. Corte frontal de riñón fijado.

Imagen

Observaciones

Muestra: Riñón de rata wister

Aumento: --

Estructuras: 1. Pelvis renal. 2.Cáliz mayor. 3. Médula renal. 4.Pirámide medular 5. Corteza

Observaciones: El órgano se notaba duro, con una diferenciación de estructuras clara tanto a simple vista como al estereoscopio; se pudo realizar más fácilmente el corte

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