TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE MEDICINA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MORFOLÓGICAS

UNIDAD ACADÉMICA DE HISTOLOGÍA

CURSO BÁSICO

DE

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

CONTENIDO

Página

SESIÓN I. EQUIPOS Y MATERIALES DE UN LABORATORIO GENERAL DE TÉCNICAS HISTOLÓGICAS.............................................................................

4

SESIÓN II. TOMA DE MUESTRA. FIJACIÓN........................................................ 6

SESIÓN III. MÉTODOS DE DESHIDRATACIÓN, ACLARACIÓN E INCLUSIÓN EN PARAFINA.

1.-MÉTODOS DE DESHIDRATACIÓN...................................................................

12

2.-INCLUSIÓN. GENERALIDADES........................................................................ 14

SESIÓN IV. MICROTOMIA O CORTE DE LOS TEJIDOS.................................... 16

SESIÓN V. DESPARAFINAJE COLORACIÓN CON HEMATOXILINA Y EOSINA. MONTAJE .................................................................................................

18

SESIÓN VI. TÉCNICAS ESPECIALES. MÉTODO DE GOLGI............................. 22

SESIÓN VII. TÉCNICAS ESPECIALES. TÉCNICA DEL ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF (TÉCNICA DE PAS)..............................................................................

29

SESIÓN VIII. TÉCNICAS ESPECIALES. COLORACIONES TRICRÓMICAS.... 31

SESIÓN IX. FUNDAMENTOS DE MICROSCOPÍA............................................... 34

BIBLIOGRAFÍA.......................................................................................................... 42

SESIÓN I

EQUIPOS Y MATERIALES DE UN LABORATORIO GENERAL DE TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

Prof. Elizabeth de Zambrano

AMBIENTE:

- Salón con paredes de bloque o concreto

- Ventilación adecuada o aire acondicionado

- Iluminación suficiente

- Fregaderos

- Mesones

CUARTO DE ALMACENAMIENTO DE SUSTANCIAS:

- Extractor

- Ventilador

- Estantes de metal

- Organización de las sustancias de acuerdo al Manual de Almacenamiento Seguro de Productos Químicos del Departamento de Higiene y Seguridad de la U.L.A

EQUIPOS:

- Balanzas analíticas

- pH metro

- Neveras, freezer

- Estufas

- Micrótomos

- Criostato

- Microscopio

- Lupa estereoscópica

- Hornilla eléctrica

- Planchas de calentamiento

- Agitador magnético

- Baño de María

- Archivadores para bloques de parafina y portaobjetos

- Destilador de agua

- Campana extractora

MATERIALES:

- Reactivos (alcoholes, formaldehído, ácidos, bases, sales, aclarantes)

- Anestésicos: éter, pentotal

- Colorantes (hematoxilina, eosina, resorcina, fucsina, azul de anilina, carmín, escarlata de Biebrich, verde luz, azul de toluidina)

- Soluciones adherentes: albúmina, gelatina, resinas

- Medios de inclusión: parafina, celoidina, resinas

- Medios de montaje: bálsamo de Canadá, Martex

- Matraces y balones pyrex (volúmenes variables)

- Probetas graduadas (calibres variables)

- Pipetas serológicas y pasteur

- Tubos de ensayo

- Embudos

- Varillas de vidrio para agitar

- Vasos de precipitado (capacidades variables)

- Capsulas de petri pyrex

- Láminas portaobjetos y cubreobjetos

- Jarra de coplin

- Cubetas y cestas de vidrio

- Pailas con mango de porcelana

- Guantes, bata de laboratorio

- Equipo de disección: mangos de bisturí, pinzas anatómicas y hemostáticas con y sin diente, gubias, tijeras punta recta y curva, pinzas, hojillas

- Inyectadoras, cánulas, agujas

- Algodón, gasas

- Papel parafilm y de filtro (watman44)

- Pinzas (sujetador de láminas)

- Pinceles

- Espátulas metálicas

- Perillas y succionadores de caucho

- Frascos transparentes y ámbar

- Soporte universal y plexiglass

- Moldes para la confección de los bloques de parafina

- Cepillos para lavar cristalería

SESIÓN II

TOMA DE MUESTRA. FIJACIÓN

Prof. Mario Salas Méndez

Toma de muestra.

Todos los pasos de la técnica histológica son muy importantes para la obtención de resultados finales satisfactorios, pero de este primer paso, depende que se puedan apreciar los detalles de las estructuras a estudiar.

El punto más importante, tiene que ver con el corte y el tamaño de la muestra a utilizar, ya que de ello depende el éxito del resto de los pasos del proceso.

“A menor tamaño de la muestra, mejores resultados en las fases siguientes”

Se dice que el tamaño de la muestra para microscopía fotónica, debe ser no mayor de un centímetro cúbico (1 cm3 ), para que la fijación sea adecuada y facilite los pasos siguientes de la técnica.

Recomendaciones para tomar las muestras:

1- La muestra debe ser tratada en forma cuidadosa con el instrumental, para evitar lesiones traumáticas de los tejidos (el instrumental, es el kit conocido como equipo de disección)

2- Las muestras deben ser pequeñas para facilitar el proceso de fijación

3- El corte de la muestra debe ser realizado con hojillas de bisturí, o en su defecto, hojillas de afeitar en perfectas condiciones, para que los bordes de la muestra sean los adecuados, evitando así áreas con cortes irregulares

4- Luego de tomada la muestra, esta debe ser introducida de inmediato en el recipiente con fijador (fijación por inmersión)

La forma en que se tome la muestra, va a depender del tipo de fijación a utilizar, de acuerdo a la técnica seleccionada:

- Si la fijación es por inmersión, la muestra debe ser colocada inmediatamente después de ser tomada en el recipiente con fijador, que siempre debe estar listo para tal fin.

- Si la fijación es por perfusión, este proceso de fijación es previo a la toma de la muestra. Luego de tomada debe ser colocada de igual forma en recipiente

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