A medida que se empezaba a saber más sobre esta la celula eucarionte, comenzaron a elaborarse diferentes métodos para estudiar los componentes estructurales y funcionales de esta.

TRABAJO PRACTICO N°5:

ORGANIZACIÓN SUBCELULAR

Alumnos:

David Castillo C.

Agustín Ponce O.

Camila Rubio F.

Sección: 8

Profesores:

Macarena Kaiser

Jorge Zúñiga

INTRODUCCIÓN

Las células son la unidad básica de la vida (1), por ende están desde el comienzo de esta en la tierra. Existen variadas teorías que dictan la aparición de la celula eucarionte; generalmente estas teorías se dividen 2 tipos: teorías simbióticas y teorías autogénicas. Siendo las primeras mayormente aceptadas. El mero hecho de la supervivencia hizo que la celula evolucionara en pos de perfeccionarse, ya sea incorporando otras células en sí misma para un mutuo beneficio (teoría endosimbiotica (2)), o invaginando su membrana plasmática para formar organelos (Hipótesis de Meyer-Abich (3))

Cada célula está viva en el sentido que puede crecer, reproducirse, convertir la energía de      una forma a otra, responder a su ambiente, etc. (4); estas características son encontradas tanto en células procariontes como eucariontes. Aunque tienen variadas similitudes, estos 2 tipos celulares difieren mucho estructuralmente, por ejemplo las células procariontes no poseen un núcleo, en cambio la celula eucarionte sí lo posee. Esto conlleva a la existencia de una variedad de organelos más especializados en la celula eucarionte tales como: mitocondrias, cloroplastos, retículos endoplásmicos (liso y rugoso), ribosomas, peroxisomas, lisosomas, etc., siendo estructuras subcelulares que, cumpliendo su función específica, dan las propiedades únicas a esta celula, ya sea animal o vegetal.

A medida que se empezaba a saber más sobre esta la celula eucarionte, comenzaron a elaborarse diferentes métodos para estudiar los componentes estructurales y funcionales de esta. Uno de ellos es el fraccionamiento subcelular, ya que permite la separación de los componentes de la celula mediante el tamaño y densidad de estos (5).

Hipotéticamente se puede decir que es posible obtener componentes celulares en grandes cantidades y con un gran grado de pureza.

OBJETIVOS

Los objetivos principales del práctico se pueden separar en los siguientes puntos:

• Observar el funcionamiento de las técnicas del fraccionamiento subcelular en diferentes muestras.
• Utilizar correctamente el microscopio para observar los cambios producidos en las muestras con y sin tinción.
• Visualizar si ocurre algún cambio de coloración en las muestras luego de ser expuestas a un cambio de temperatura.

MATERIALES Y METODOS

Primeramente comenzaremos ordenando nuestro material de trabajo, el que estaba compuesto por 5 tubos de ensayo en una gradilla, agua destilada, 4 tubos Falcon de 15ml, 2 gotarios, porta objetos y cubreobjetos, un microscopio, una muestra que consiste en un homogenizado de hígado de pollo

Iniciando nuestro práctico, nuestro docente nos entregó el homogenizado de hígado de pollo que luego de extraerle 5ml de muestra, se dejó en hielo. Los 5ml de muestra se introdujeron en un tubo Falcon (HC) para luego introducirlo en la centrífuga por 10 minutos a 4°C. Transcurrido el tiempo estimado, se extrajo una gota de sobrenadante para ser observada en el microscopio con y sin tinción.

Del tubo (HC) se extrajo el resto de sobrenadante, este se transfirió a un segundo tubo Falcon (P1) esta muestra es insertada en la centrífuga por 20 minutos a 4°C, al terminar este proceso se extrajo el sobrenadante de P1, para transferirlo a un tercer tubo Falcon (P2). Al pellet del tubo P1 se le agregó 1ml de suero fisiológico, y se dejó en frio.

El tubo P2 se introdujo en la centrífuga por 10 minutos a 4°C, terminado el proceso, el sobrenadante se transfiere a un cuarto tubo Falcon (P3). El pellet de P2 se le agregó 1ml de suero fisiológico y se dejó en frio. El tubo P3 se insertó en la centrifuga por 10 minutos a 4°C, luego de esto, se le extrajo el sobrenadante para ser desechado, el pellet restante se le agregó 1 ml de suero fisiológico y se dejó en frio.

Se dispusieron 5 tubos de ensayo (rotulados de forma ascendente), a los cuales se les agregó 1ml de Succinato, 1ml de azul de metileno, y 1ml de agua destilada. El tubo N°1 fue el tubo de control, al tubo N°2 se le agregó 1ml de Homogeneizado crudo (HC), al tubo N°3 se le agregó 1ml de fracción nuclear (P1), al tubo N°4 se le agregó 1ml de fracción mitocondrial(P2), y al tubo N°5 se le agregó 1ml de fracción microsomal(P3).

Luego de que cada uno de los tubos tenía su contenido listo, se les agrega 1ml de vaselina liquida para sellar la muestra. Por consiguiente se pusieron las muestras en un baño termorregulador a 37° C. Se observaron cambios en la coloración en algunas de las muestras.

RESULTADOS

A continuación se presentan los resultados para cada actividad según corresponda:

Actividad 1:

Actividad A 2.1

• Figura 1:

[pic 2]

Título de muestra: Solución de pellet del tubo HC + 1ml de suero fisiológico.

Tipo de muestra: temporal

Tinción: ninguna

Aumento objetivo: 40x

Aumento total: 400x

Observaciones: se pueden observar distintas circunferencias de un color más oscuro relativamente separadas, suponemos que son núcleos de célula, ya que la muestra es sacada del pellet del tubo HC, como sabemos el pellet de cualquier homogenizado corresponde al contenido de mayor masa en esta, ya que el homogenizado contenía sólo células de hígado de pollo con su membrana celular rota, el pellet  debería contener los núcleos de estas células.

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