Actividad enzimatica de la invertasa
Enviado por estefi13101999 • 7 de Octubre de 2018 • Informe • 2.589 Palabras (11 Páginas) • 851 Visitas
Introducción
La invertasa (β-fructofuranosidasa, EC 3.2.1.26), conocida también con el nombre de sacarasa, es una enzima que cataliza la hidrólisis de los terminales no reductores β-d-fructofuranosílicos. Además, posee una característica conformacional, que consistente en dos residuos ácidos que constituyen el mecanismo catalítico responsable de la ruptura de los enlaces glucosídicos. Esta enzima actúa sobre la sacarosa, en la cual hidroliza la fructosa y la glucosa mediante la siguiente reacción reversible:
Sacarosa ↔ Fructosa + Glucosa
La sacarosa puede ser hidrolizada de manera relativamente fácil y al contrario que la mayoría de las enzimas, la invertasa presenta una alta actividad dentro de una amplia gama de pH (3,5-5,5), con pH óptimo a 4,5 y con una actividad enzimática que alcanza su máximo a los 55 °C. El estudio de la actividad de la invertasa tiene un gran interés para la investigación aplicada, ya que se trata de una de las enzimas más conocidas siendo la primera que se estudió con profundidad.
Esta enzima se encuentra en levaduras, en abejas; en plantas y en bacterias, como por ejemplo las que se encuentran en el intestino humano, por otro lado, un déficit de invertasa en este ultimo, provoca una enfermedad conocida como intolerancia a la sacarosa. La sacarosa pasa al intestino grueso donde es fermentada por bacterias, como Bacterioides thetaiotamicron y Bifidobacterium longum, provocando diarreas ácidas con peligro de deshidratación, flatulencia, sangrado y pérdida de peso. El tratamiento está basado en una dieta con ausencia de sacarosa, almidón y dextrinas.
La invertasa es una enzima muy utilizada en la industria alimentaria. Ya que la fructosa tiene más poder edulcorante, más poder humectante, más solubilidad y por tanto, menor tendencia a cristalizar y endurecerse. De este modo, actúa como agente de ablandamiento en alimentos azucarados con tendencia a cristalizar la sacarosa y evaporar agua. Esto afecta a su aspecto y a su consistencia.
Los objetivos a tratar en este informe son:
- Extraer la invertasa de levadura y verificar su acción sobre una solución de sacarosa, la cual se comprobara con un test de Fehling, el que permite detectar la presencia de los productos de la hidrolisis de este disacárido.
Materiales y procedimientos:
- Materiales:
- Mortero
- Tubos para centrifuga 15 ml
- Centrifuga
- Gradilla
- Tubos de ensayo
- Micropipeta
- Puntas micropipetas
- Mechero
- Pinzas madera
- Soluciones y reactivos:
- Levadura (saccharomyces cerevisiae)
- Sol. Sacarosa 0,02 M
- Sol. Sucralosa 0,5%
- Sol. Almidón 1%
- Sol. Sulfato de cobre (CuSO4)
- Reactivo de Fehling A y B
Procedimiento:
- Obtención de la enzima:
- Coloque de 4 a 5 g de levadure de cerveza (saccharomyces cerevisiae) en un mortero y homogeneice en 15 ml de bicarbonato de sodio 0,1 M. mezcle e incube a temperatura ambiente durante 10 min, agitando periódicamente.
- Transfiera el homogenizado a un tubo Falcon de 15 ml y centrifugue a 2.000 rpm. Recupere el sobrenadante, el cual contiene la enzima. Este será el extracto enzimático (EE) a utilizar en el práctico.
- Tome una alícuota de 2 ml del EE y hervirla, calentando directamente al mechero. Este será el extracto enzimático hervido (EEH).
2. Proceso enzimático:
- Prepare una batería de tubos de ensayo siguiendo las indicaciones de la siguiente tabla:
Tabla n°1: preparación de tubos de ensayo
Tubo | Solución |
1 | 2 ml de sacarosa 0,02 M |
2 | 2 ml de sacarosa 0,02 M y 0,5 ml de extracto enzimático |
3 | 2 ml de sacarosa 0,02 M y 1 ml de extracto enzimático |
4 | 2 ml de sacarosa 0,02 M y 1 ml de extracto enzimático hervido |
5 | 2 ml de sacarosa 0,02 M con 0,25 ml de NaOH a 0,5% y 1 ml de extracto enzimático |
6 | 2 ml de sacarosa 0,02 M con 1 ml de NaOH a 0,5% y 1 ml de extracto enzimático |
7 | 2 ml de sacarosa 0,02 M con 0,25 ml de CuSO4 a 0,25% y 1 ml de extracto enzimático |
8 | 2 ml de sacarosa 0,02 M con 1 ml de CuSO4 a 0,25% y 1 ml de extracto enzimático |
9 | 2 ml de sucralosa 0,5 % |
10 | 2 ml de sucralosa 0,5 % y 1 ml de extracto enzimático |
11 | 2 ml de almidón |
12 | 2 ml de almidón y 1 ml de extracto enzimático |
Resultados
Tabla n°2: resultados al test de fehling
Número del tubo de ensayo | Resultado frente al reactivo de Fehling |
1 | Negativo, da un color azul. |
2 | Medianamente positivo, da un color negro. |
3 | Medianamente positivo, da un color gris-negruzco. |
4 | Negativo, da un color azul rey. |
5 | Negativo, da un color azul rey. |
6 | Negativo, da un color azul rey. |
7 | Negativo, da un color azul rey. |
8 | Negativo, da un color azul rey. |
9 | Negativo, da un azul translúcido. |
10 | Negativo, da un azul rey. |
11 | Negativo, da un azul traslúcido. |
12 | Negativo, da un color azul rey. |
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