INFORME N°04 ACTIVIDAD ENZIMATICA

INFORME N°04

ACTIVIDAD ENZIMATICA

1. OBJETIVOS

• Efectuar pruebas para determinar la acción de una enzima y estudiar la influencia de la temperatura sobre su actividad.

1. FUNDAMENTO TEORICO

Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran la velocidad de las reacciones metabólicas que ocurre tanto a nivel celular como fuera de ellas, sin sufrir ellas cambios en su estructura y/o función. La acción de las enzimas, por sus características fisicoquímicas, puede afectarse por las condiciones presentes en el lugar de acción de estas. Entre los principales factores que pueden modificar la acción enzimática tenemos la temperatura, inductores e inhibidores, pH.

Las enzimas son muy específicas para los reactantes o sustratos sobre las cuales actúan, el grado de especificidad del sustrato varia. Una enzima puede reaccionar  con un grupo de sustancias de estructuras estrechamente relacionados, mientras que otras solo puede actuar sobre un compuesto molecular único.

Para el proceso de digestión, las biomoléculas ingeridas en la dieta deben ser degradadas a sus componentes más sencillos para ser absorbidas a nivel del tubo digestivo y así llegar al lugar correspondiente a nivel celular donde participan en diversos procesos metabólicos indispensables para el mantenimiento de una adecuada homeostasis. Entre las principales enzimas que participan en la digestión podemos citar: la amilasa salival y pancreática para la digestión de carbohidratos; la lipasa y  fosfolipasa para la digestión de lípidos, pepsina y quimiotripsina para las proteínas.

1. MATERIALES, REACTIVOS Y/O EQUIPOS

1. Materiales y/o Equipos

• Cocina eléctrica
• Equipo de baño maría
• Termómetro
• Varilla de vidrio
• Tubos de ensayo
• Portaobjetos
• Pinzas
• Gotero
• Probeta
• Vaso de precipitado 100,150,200 ml
• Luna de reloj

1. Reactivos

• agua destilada
• solución de almidón al 1%
• suspensión de almidón al 1%
• solución de yodo
• reactivo de Benedict

1. Reactivo Biológicos

• reactivo de Benedict
• solución de almidón al 1%
• suspensión de almidón al 1%

1. PARTE EXPERIMENTAL

Digestión del almidón mediante la amilasa de la saliva

1. Primero, en un vaso de precipitados de 10 ml vertimos 25 ml de la solución de almidón al 1 %, en otro vaso de precipitados de 100 ml vertimos 25 ml de suspensión de almidón al 1%
2. Obtuvimos dos muestras de saliva, de 1 ml cada uno  y lo vertimos en dos tubos de ensayo pequeños por separado.
3. Llevamos los dos vasos de precipitados y los dos tubos de ensayo en un baño María manteniendo su temperatura de 38 °C, luego de transcurridos 3 o 5 minutos, vertimos el contenido de cada tubo en cada vaso de precipitados.

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1. En intervalos de 1 minuto, sacamos separadamente de cada vaso una gota de la solución y la mezclamos con una gota de solución de yodo, sobre un portaobjetos.

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1. Indicamos el tiempo requerido para alcanzar el punto acromático.
2. Una vez que obtuvimos el punto acromático efectuamos la prueba de Benedict con el contenido de cada vaso. Anotamos nuestras observaciones                            

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 Influencia de la temperatura sobre la amilasa de la saliva

1. Marque 3 tubos de ensayo como A, B Y C y coloque en cada uno de ellos 5 ml de solución de almidón al 1 %

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1. Preparamos 1 baño de hielo. 1 baños a 38°C y otro a 70 °C

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1. Colocamos el tubo A en el baño de hielo, el B en el baño con agua a 38 °C  y el C en el baño de 70°C
2. En otros 3 tubos de ensayo, colocamos respectivamente 2ml de una solución de saliva, preparada disolviendo 0,5ml de saliva en 25ml de agua destilada. Colocamos cada uno de estos tubos con saliva en cada uno de los baños hasta alcanzar la temperatura de equilibrio.
3. Cuando lleguen a la temperatura de equilibrio, vertimos la saliva en las soluciones respectivas de almidón, las mezclamos bien y sacamos 2 gotas de cada mezcla para efectuar rápidamente la solución con yodo sobre un portaobjetos.
4. Efectuamos esta prueba cada 2 minutos y después de 10 min, cada 5 minutos hasta obtener el unto acromático.

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1. RESULTADOS

        Tabla 1: Color producido por la solución de yodo después de añadir saliva al almidón

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