Determinación de aminoácidos por cromatografía de capa delgada en extractos de vegetales

Determinación de aminoácidos por cromatografía de capa delgada en extractos de vegetales

DAYANA DE LA VEGA*, CESAR O. RAMOS*., YARITHZA A. LEIVA C*

*Programa de Química, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia, Florencia, Colombia.

[pic 1]

Introducción

Los aminoácidos constituyen la base fundamental de cualquier molécula biológica, y son compuestos orgánicos. No puede realizarse proceso biológico alguno, sin que en alguna fase del mismo intervengan los aminoácidos. Las proteínas son sustancias orgánicas nitrogenadas de elevado peso molecular, y todas están constituidas por series definidas de aminoácidos. Estos aminoácidos son por tanto las unidades básicas de las proteínas.

Las plantas sintetizan los aminoácidos a través de reacciones enzimáticas, por medio de procesos de animación y transaminación, los cuales conllevan un gran gasto energético por parte de la planta. Partiendo del ciclo del nitrógeno, se plantea la posibilidad de poder suministrar aminoácidos a la planta, para que ella se ahorre el trabajo de sintetizarlos, y de esta forma poder obtener una mejor y más rápida respuesta en la planta. 

Hay una amplia gama de métodos colorimétricos que permiten la determinación cuali- y cuantitativa de aminoácidos. Aunque son métodos muy generales, algunos de ellos permiten discriminar entre  diferentes  tipos de estos compuestos. En general, en todos los métodos, el aminoácido reacciona con otro compuesto formando derivados  coloreados que se pueden determinar cualitativamente o si es posible por espectroscopia visible.

Para el desarrollo de esta práctica utilizaremos la cromatografía en capa fina el cual es un caso de cromatografía de reparto en la que los componentes de una mezcla se separan por diferencia de solubilidad entre dos sistemas disolventes. El parámetro experimental asociado a la técnica es el Rf (coeficiente de reparto), relacionado con la solubilidad relativa de un compuesto entre la fase estacionaria y fase móvil, y que depende de su estructura química y su hidrosolubilidad/liposolubilidad. Uno de los factores más críticos en este tipo de cromatografías es la elección de la fase móvil, que, básicamente, suele estar formada por una mezcla de un solvente orgánico con agua y algunas sustancias adicionales tales cómo ácidos, bases, agentes acomplejantes, etc., cuya finalidad es aumentar o disminuir la solubilidad de algunos compuestos.

Resumen

Para el reconocimiento de cada uno de los aminoácidos presentes en los extractos vegetales, se utilizó la técnica  de cromatografía en capa fina, teniendo como fundamento la separación de un soluto entre dos  fases (estacionaria y móvil), en este caso el homogenizado o extracto  vegetal  (fresa, cilantro, lechuga, repollo, espinaca) será tal soluto.La muestra y los patrones fueron aplicadas sobre placa, mediante capilares; se utilizó un solvente específico para deducir cual tenía mejor afinidad con las muestras;  para la revelación de las placas se aplicó nihindrina la cual mostraba el recorrido que se obtuvo de la muestra y los patrones. Estos  patrones fueron tomados como referencia  y de acuerdo  a la composición de cada homogenizado vegetal  se puedo deducir la presencia de ciertos aminoácidos  mediante la comparación de los Rf.

Palabras clave:

Abstract.

For the recognition of each one of the present amino acids in the vegetable extracts, the technique of chromatography was in use in thin cap, taking the separation of a soluto as a foundation between two phases (stationary and mobile), in this case the homogenized one or vegetable extract (strawberry, coriander, lettuce, cabbage, spinach) itwill be such a soluto.

The sample and the bosses were applied on plate, by means of capillaries; a specificsolventwas in use for deducing which hadbetteraffinitywith the samples; for the revelation of the platesthere applied itself nihindrina which wasshowing the tour thatwasobtained of the sample and the bosses. These bosses were taken as a reference and in agreementto the composition of everyhomogenized vegetable can be deduced the presence of certain amino acids by means of the comparison of the Rf.

Keyword:

Materiales y Métodos

Se usó como muestra diferentes vegetales. Para la organización de la celda cromatografía se utilizó diferentes volúmenes de butanol, acetona, ácido acético y agua. Se utilizó como patrones soluciones de glutamato (E), aspartato (D), glutamina (Q), cisteína (C), triptófano (W), tirosina (Y), fenilalanina (F), isoleucina (I), valanina (V), glicina (G); al 0.85%.Como solución reveladora se usóninhidrina.

Se maceró 0.5g de muestra con la solución salina. Posteriormente, se aplicó la muestra y los patrones en la placa de acetato de celulosa y se dejó secar, en un horno. Mientras se saturaba la cámara. Luego de sumergía en la cámara correspondiente a cada muestra.

Transcurrido el tiempo de ascenso del solvente, la placa se colocó en la sustancia reveladora y se trasladó al horno para visualizar los aminoácidospresentes.

Resultados y Discusión [pic 2]

Las separaciones por cromatografía en papel se realizaronde la siguiente forma. En las placas se vertieron las diferentes gotas de cada muestra y de cada aminoácido. Una vez que el disolvente se evaporó. La placa se colocó en un recipiente cerrado saturado con los vapores del disolvente. Posteriormente se sumergió con cuidado un extremo de la placa directamente con el disolvente.[pic 3]

Tabla 1: Disolventes involucrados en el sistema cromatografico de cada grupo.

Cuando el eluyente había recorrido la mitad, se retiró del recipiente y se dejó secar. Después de este proceso se determinó las posiciones de los aminoácidos rociando la placa con anhídrina , un reactivo que forma un reactivo entre rosado y morado al combinarse con los aminoácidos.

[pic 4]

Figura 2: Cromatogramas de capa fina de algunos aminoácidos. Disolventes ver en la tabla 1.Aminoácidos: glutamato, aspartato, glutamina, cisteina, tirosina, triptófano, fenilalanina, isoleucina, valina, glicina.

...