Métodos para la cuantificación de proteínas

Métodos para la cuantificación de proteínas

Método de Bradford: Se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 µg), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas.

Método de BCA: El ácido bicinconínico, sal sódica, es un compuesto capaz de formar un complejo púrpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un método analítico capaz de monitorizar el ión cuproso producido en una reacción entre las proteínas con Cu2+ en medio alcalino (reacción de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromóforo proporciona un método para la cuantificación de proteínas que es sencillo, rápido, muy sensible, y que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros métodos.

Método de Lowry: El método de Lowry es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se le añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas, siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer

Turbidimetría: Medición de la turbidez resultante de la precipitación de proteínas (precipitación con ácido tricloroacético-TCA o sulfosalicílico).

METODO UV: Las proteínas muestran un fuerte grado de absorción a 280nm en uv, principalmente por los residuos de triptófano y la tirosina, ya que las concentraciones de estos aminoácidos en las proteínas es francamente constante, se puede utilizar la absorbancia a 280nm para estimar la concentración de proteínas.

Explique cuando es positiva la reacción de biuret, escriba la reacción.

El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a 540 nm. Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas.

La Prueba de Biuret es un ensayo general para las proteínas. Cuando una proteína reacciona con el cobre (II) sulfato (azul), la prueba positiva es la formación de un complejo de color violeta. La intensidad del color es proporcional a la concentración de proteínas.

Consultar de qué depende la solubilidad de las proteínas.

La solubilidad depende de diversos factores como: pH, disolventes ( efecto hidrofobicos), fuerza iónica (μ), ( efecto Salting- in), constante dieléctrica,

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