Separación E Identificación De Aminoácidos De Jugos De Frutos Por Cromolitografía Bidimensional En Capa Fina

LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS

PRÁCTICA N° 1: “SEPARACIÓN Y EXTRACCIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMNSIONAL EN CAPA FINA.”

OBJETIVOS:

- Conocer más a fondo el fundamento de la cromatografía pero ahora enfocado hacia el uso de más de una fase móvil y cuál es su función.

- Comparar los resultados obtenidos entre una cromatografía unidimensional y una bidimensional.

RESULTADOS:

FIGURA 1. Cromatografía Unidimensional I; fase móvil: cloroformo-metanol-amoniaco 17%. FIGURA 2. Cromatografía Unidimensional II; fase móvil: Butanol-ácido acético-agua.

FIGURA 3. Cromatografía Bidimensional III. Aminoácidos tipo. FIGURA 4. Cromatografía Bidimensional IV. Problema (Sandía)

Tabla 1. Rf´s de los Cromatogramas Unidimensionales de soluciones de aminoácidos Tipo (Orden Creciente).

Aminoácidos 1° Fase móvil 2° Fase móvil

Rf Rf

Arginina 0.12 0.13

Lisina 0.39 0.09

Prolina 0.65 0.26

Glicina 0.74 0.28

Glutámico 0.8 0.34

Histidina 0.82 0.1

Treonina 0.83 0.36

Tirosina 0.85 0.58

Metionina 0.87 0.54

Fenilalanina 0.92 0.62

Tabla 2. Rf´s de Cromatograma Bidimensional con soluciones de aminoácidos Tipo (Orden Creciente).

N° de Mancha 1° Fase Móvil 2° Fase Móvil Aminoácidos Correspondiente

Rf Rf

8 0.06 0.09 Lisina

2 0.09 0.13 Arginina

1 0.13 - No Identificado

7 0.2 - No Identificado

6 0.24 - No Identificado

5 0.25 - No Identificado

3 0.29 - No Identificado

4 0.32 0.28 Glicina

9 0.49 0.34 Glutámico

10 0.56 - No Identificado

11 0.64 0.62 Fenilalanina

Tabla 3. Rf´s de Cromatograma Bidimensional Problema (Orden Creciente).

N° de Mancha 1° Fase Móvil 2° Fase Móvil

Rf Rf

4 0.09 0.09

1 0.13 0.13

5 0.16 -

2 0.17 -

7 0.2 -

5 0.26 0.26

8 0.29 0.29

6 0.32 0.32

9 0.56 0.56

10 0.62 0.64

Tabla 4. Rf´s de Cromatograma Bidimensional Problema (Aminoácidos Identificados).

N° de Mancha 1° Fase Móvil 2° Fase Móvil Aminoácidos Correspondiente

Rf Rf

1 0.13 0.13 Arginina

4 0.09 0.09 Lisina

5 0.26 0.26 Prolina

6 0.32 0.32 Glutámico

8 0.29 0.29 Glicina

9 0.56 0.56 Metionina

10 0.62 0.64 Fenilalanina

DISCUSIÓN:

De acuerdo a los resultados obtenidos, se muestra en las figuras 1 y 2 los cromatogramas unidimensionales tipo, estos fueron de gran ayuda dado que pudimos hacer la comparación entre los aminoácidos tipo y el problema que en este caso fue jugo de sandía, de manera que “aparentemente” se identificaron todos los aminoácidos tipo en el problema de ambos cromatogramas unidimensionales; y esto se presume fue así dado que el primer cromatograma que se eluyó en la primera fase móvil que fue de cloroformo-metanol-amoniaco, no eluyó de manera adecuada y esto derivo en la mezcla del aminoácido arginina con la glicina, tal y como se observa en la figura 1.Por lo que se tuvo que hacer la comparación tomando como referencia el cromatograma de otro equipo.

Cabe mencionar que la finalidad de estos cromatograma unidimensionales fue el de corroborar que realmente se encontraban presentes por lo menos algunos de los aminoácidos tipo en el jugo de sandía en ambas fases móviles por separado.

En cuanto al cromatograma bidimensional de aminoácidos tipo, que corresponde al cromatograma III se pueden observar los aminoácidos tipo de manera menos definida, esto tal vez debido a que se mezclaron todos los aminoácidos en una sola aplicación, sin embargo con respecto al cromatograma IV, en donde se eluyó el jugo de sandía que en este caso fue el problema, ambos se pueden observar a escala en las figuras 3 y 4.

En consecuencia de este último cromatograma se contaron un total de 11 manchas, de las cuales de acuerdo a los Rf´s reportados en las tablas 2 y 3; solo 7 de las manchas corresponden a los siguientes aminoácidos: arginina ,lisina, prolina, Ácido

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