Separación e identificación de aminoácidos de jugos de frutas por cromatografía bidimensional en capa fina
Enviado por Jose Manuel Miranda Onofre • 7 de Marzo de 2016 • Informe • 1.666 Palabras (7 Páginas) • 2.118 Visitas
Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Métodos de Análisis
Separación e identificación de aminoácidos de jugos de frutas por cromatografía bidimensional en capa fina
Profesora: Rosas Sandoval Guillermina
Alumno: Miranda Onofre José Manuel
Grupo: 4IV1
Fecha de entrega: 24 de febrero de 2016
Fundamento.
Los 20 aminoácidos estándar encontrados en las proteínas son alfa-aminoácidos. Tienen todos un grupo carboxilo y un grupo amino unidos al mismo átomo de carbono (el carbono alfa). Difieren unos de otros en sus cadenas laterales, o grupos r, que varían en estructura, tamaño y carga eléctrica y que influyen en la solubilidad en agua de los aminoácidos. Además de estos 20 existen muchos más que se encuentran con menor frecuencia.
Objetivos.
- Separar los aminoácidos presentes en el jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.
- Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.
- Compara el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.
Resultados.
Cromatograma 1.
En el caso de esta cromatografía se realizó de forma unidimensional con una fase móvil de solución de cloroformo-metanol-amoniaco (2:2:1) en la cual se colocaron los aminoácidos tipo y una muestra de nuestra solución problema de jugo de naranja obteniéndose lo siguiente una vez revelado con solución de ninhidrina.
[pic 1]
Imagen1. Cromatografía uno.
Los aminoácidos están acomodados en orden alfabético y la muestra de jugo de naranja es la que se encuentra al final.
Una vez realizado el revelado se procedió a calcular los Rf para cada mancha observada en la placa de la siguiente forma y se tabularon en orden ascendiente respecto del Rf a excepción de la muestra la cual se colocó al final.
[pic 2]
Aminoácido | 1a fase móvil | ||
Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf | |
Arginina | 2.2 | 7.2 | 0.3055 |
Lisina | 3.1 | 7.2 | 0.4305 |
Prolina | 4.7 | 7.2 | 0.6527 |
Glicina | 5.2 | 7.2 | 0.7222 |
Ácido glutámico | 5.9 | 7.2 | 0.8194 |
Histidina | 6.2 | 7.2 | 0.8611 |
Treonina | 6.5 | 7.2 | 0.9027 |
Tirosina | 6.5 | 7.2 | 0.9027 |
Metionina | 6.6 | 7.2 | 0.9166 |
Fenilalanina | 6.8 | 7.2 | 0.9444 |
Muestra | 0.4, 2.3, 4.5, 6.1 | 7.2 | 0.0555, 0.3194, 0.625,0.9305 |
Tabla 1. Resultados de cromatograma 1.
Cromatograma 2.
En la segunda placa, al igual que en la primera, se realizó una cromatografía unidimensional, solo que esta vez se utilizó un solvente distinto, butanol-ácido acético- agua (3:1:1), dándonos los siguientes resultados una vez revelados con ninhidrina. Las muestras están acomodadas de la misma forma que en el cromatograma 1.
[pic 3]
Imagen 2. Cromatograma dos.
Después se calcularon los Rf de las manchas observadas y si tabularon siguiendo el mismo orden que en la tabla 1.
Aminoácido | 2a fase móvil | ||
Frente del soluto | Frente del disolvente | Rf | |
Arginina | 1.1 | 8.4 | 0.1309 |
Lisina | 0.8 | 8.4 | 0.0952 |
Prolina | 2.2 | 8.4 | 0.2619 |
Glicina | 2.5 | 8.4 | 0.2976 |
Ácido glutámico | 2.9 | 8.4 | 0.3452 |
Histidina | 1.1 | 8.4 | 0.1309 |
Treonina | 2.8 | 8.4 | 0.3333 |
Tirosina | 4.8 | 8.4 | 0.5714 |
Metionina | 4.5 | 8.4 | 0.5357 |
Fenilalanina | 5.1 | 8.4 | 0.6071 |
Muestra | 0.8, 3.2, 4.8 | 8.4 | 0.0952,0.3809, 0.5714 |
Tabla 2. Resultados de cromatograma 2.
Cromatograma 3.
En este caso se procedió a realizar una cromatografía bidimensional pero solo con los aminoácidos tipo. Esto se llevó a cabo colocando cada uno de los aminoácidos en el mismo punto y dejándolos correr primero en una fase móvil compuesta de cloroformo-metanol-amoniaco (2:2:1) y después en una fase móvil de butanol-ácido acético- agua (3:1:1) para después revelarlos con ninhidrina. Cabe mencionar que en esta placa se cometió el error de colocar la ninhidrina después de terminar el corrimiento en la primera fase móvil y no después de la segunda como debía ser.
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