“ACTIVIDAD ENZIMATICA”

INDICE

Contenido                                                                                              Pg.

1.        Introducción        2

2.        Objetivos        3

3.        Fundamentos        3

3.1        Marco Teórico        3

3.1.1  Enzimas        3

3.1.2  Clasificacion de las enzimas        4

3.1.3 Sitio activo de las enzimas         4

3.1.4 Cinética de las reacciones enzimáticas        5

3.1.5 Efecto del pH y temperatura en las enzimas         7

3.1.6 Catalasa        9

3.1.7 Mecanismo de reaccion de la catalasa        10

3.1.8 Aplicación de las enzimas catalasa        11

3.2        Reseña de articulo científico         13

4.        Metodología         14

4.1        Diagrama de procesos        14

4.2        Reacciones        16

4.3        Hojas de seguridad-MSDS        16

5.        Referencias        17

1. INTRODUCCIÓN

La práctica de laboratorio número 03. denominada “ACTIVIDAD ENZIMATICA” la cual se llevará a cabo el jueves 18 de junio del 2020. La práctica tiene como objetivo general, Determinar de manera experimental la actividad catalítica de la enzima catalasa de una muestra de hígado bovino y papa.

La práctica tiene como finalidad, Determinar la cantidad de oxígeno liberado en la reacción entre la catalasa presente en la muestra de hígado bovino y el peróxido de hidrógeno, Determinar la cantidad de oxígeno liberado en la reacción entre la catalasa presente en la muestra de papa y el peróxido de hidrogeno. Y, Identificar la relación que existe entra la temperatura y la actividad enzimática.

Las enzimas además de servir como catalizadores para todos los procesos metabólicos, su impresionante actividad catalítica, especificidad para sustrato y estereoespecificidad permiten a las enzimas desempeñar funciones clave en otros procesos relacionados con la salud y el bienestar de los seres humanos. La estereoespecificidad absoluta de enzimas es en particular valiosa para uso como catalizadores solubles o inmovilizados para reacciones específicas en la síntesis de un fármaco o antibiótico.

Principalmente, la práctica tiene como fin determinar las características de las enzimas, para ello, primero, se pesará cierta cantidad de hígado (cortado en pequeños pedazos), para luego colocarlo en el tubo del sistema generador de gases, después, se conectará un extremo de la manguera a la parte curva de un tubo con forma de “J”. Posteriormente, se llenará con agua la mitad de un vaso de precipitados, luego, se llenará una probeta hasta el borde superior, igual con agua.

Luego, se introducirá dentro de la probeta, el extremo libre del tubo en forma de “J”, se invertirá la probeta y se introducirá está dentro del vaso de precipitados. Luego, se agregará peróxido de hidrógeno sobre los trozos de hígados, se debe tapar rápidamente. Por consiguiente, se observarán los cambios del desplazamiento del agua por el oxígeno que ingresa a la probeta, esto con el objetivo de medir el volumen de agua desplazada en la probeta y se calculará el porcentaje de oxígeno generado. Se repetirá el proceso, pero, con trozos de papa.

Ahora bien, como un segundo procedimiento, se colocará en un mortero pequeños trozos de hígado bovino. Se añadirá agua y se proseguirá con la trituración de los pedazos para degradar las células y liberar su contenido. Posteriormente, se filtrará la mezcla y se rotularán dos tubos de ensayo, para luego colocar una cantidad determinada del filtrado en cada tubo.

Finalmente, se calentará en un mechero el segundo tubo de ensayo durante un tiempo determinado, para luego, añadir unas gotas de peróxido de hidrógeno en ambos tubos de ensayo, con el fin de anotar las observaciones que se puedan manifestar.

1. OBJETIVOS

2.1 Objetivo General

1. Determinar de manera experimental la actividad catalítica de la enzima catalasa de una muestra de hígado bovino y papa.

     2.2 Objetivos Específicos

1. Determinar la cantidad de oxígeno liberado en la reacción entre la catalasa presente en la muestra de hígado bovino y el peróxido de hidrógeno.

2. Determinar la cantidad de oxígeno liberado en la reacción entre la catalasa presente en la muestra de papa y el peróxido de hidrogeno.

3. Identificar la relación que existe entra la temperatura y la actividad enzimática.

1. FUNDAMENTO

3.1 Marco Teórico

3.1.1 Enzimas

Una enzima es un catalizador biológico que lleva a cabo reacciones bioquímicas a muy altas velocidades y con un elevado grado de especificidad. En su ausencia la mayoría de las reacciones biológicas que sustentan la vida no se llevarían a cabo. Con base en este mismo autor todas las enzimas son proteínas, tienen una estructura tridimensional globular, están formadas generalmente por una sola cadena polipeptídica, y solo logran ser activas cuando los polímeros desarrollan una conformación que permite establecer su centro activo. En muchos casos están integradas por una parte proteínica y otra que no lo es. La primera se conoce como apoenzima y la segunda como activador enzimático. Este último es un compuesto de peso molecular bajo, muy estable al calor, que presenta diversos grados de unión con la apoenzima. (Badui Dergal, 2013)

La mayoría de las enzimas poseen un alto grado de especificidad, es decir su intervalo de acción se limita a un determinado tipo de compuesto que debe reunir ciertas características para que pueda ser utilizado como sustrato. La especificidad se encuentra dividido en 4 grupos: (Badui Dergal, 2013)

• Especificidad estereoquímica: Se refiere a que normalmente utilizan D o L isómeros como sustrato, ya que la enzima es capaz de reconocer esta estereometría y diferenciar entre su sustrato específico y sus estereoisomeros. (Badui Dergal, 2013)

• Baja Especificidad: Estás se presentan cuando las enzimas atacan un determinado tipo de enlace químico sin importar la naturaleza del sustrato. (Badui Dergal, 2013)

• Especificidad de grupo: Se presenta cuando las enzimas actúan sobre un sustrato que contiene un determinado enlace y un grupo químico específico al lado de este. (Badui Dergal, 2013)

• Especificidad absoluta: Es la más común y consiste en que la enzima utiliza como sustrato una sola sustancia muy específica. (Badui Dergal, 2013)

3.1.2 Clasificación de las enzimas

Se pueden clasificar las enzimas según su actividad de la siguiente manera:

• Hidrolasas: Catalizan reacciones de hidrólisis, rompiendo los enlaces con moléculas de agua. A este grupo pertenecen principalmente las enzimas digestivas.
• Isomerasas: Catalizan las reacciones de isomerización.
• Ligasas: Catalizan la unión de moléculas.
• Liasas: Catalizan las reacciones de adición de enlaces o eliminación, para producir dobles enlaces.
• Oxidorreductasas: Catalizan reacciones de óxido-reducción. (transferencia de electrones de una molécula a otra)
• Tansferasas: Catalizan la transferencia de un grupo de una sustancia a otra.

(Murray, 1994)

3.1.3 Sitio Activo de las enzimas

Dentro de una enzima no todos los aminoácidos intervienen en la catálisis de la reacción, ya que en la mayoría de los casos solo unos pocos son responsables de esta función, por lo que es posible, en ocasiones eliminar parte de la cadena polipeptídica sin que se pierda la actividad. Con base en este mismo autor el sitio activo de una enzima es aquella porción de la proteína que participa directamente en la unión y la transformación del sustrato, está integrado por ciertos aminoácidos selectos que integran un microambiente característico dentro de la propia cadena y que llevan a cabo la reacción. Generalmente existe sólo uno por molécula de enzima, no obstante, una enzima puede tener más de un sitio activo. Las enzimas adquieren su poder catalítico cuando presentan una estructura secundaria y terciaria muy específica, de tal manera que los aminoácidos correspondientes del sitio activo se encuentran en posición vecinal estableciendo dicho microambiente. (Badui Dergal, 2013)

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