Bioquimica

SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS POR CROMATOGRAFÍA

CHROMATOGRAPHIC SEPARATION OF AMINO ACIDS

Mauro José Fuentes Mercado, Sergio Moreno Carreño, Alba Lucía Parra Montiel

Programa de Ingeniería de alimentos. Departamento de ingeniería de alimentos. Facultad de ingenierías. Universidad de córdoba. Sede Berástegui.

RESUMEN

En este laboratorio se realizo la separación de aminoácidos mediante una técnica muy rápida y eficaz como es la cromatografía de papel, como todos sabemos es de suma importancia la identificación de los aminoácidos. Este método fue realizado para identificar aminoácidos como lo son Glisina, Arginina, Ac. aspártico, Alanina. El procedimiento se hizo cortando un papel filtro con mediciones y lados iguales y luego se le añadió los respectivos aminoácidos anteriormente mencionados y por ultimo se confirmo la presencia de los aminoácidos, y se compararon los resultados con los de la literatura

Palabras Claves: Aminoacidos, cromatografía.

TEORIA.

La cromatografía es el método usado principalmente para la separación de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una película.

Se utiliza el término general de lecho para definir las distintas formas en que puede encontrarse la fase estacionaria. Las separaciones cromatográficas se consiguen mediante la distribución de los componentes de una mezcla entre la fase fija y la fase móvil. La separación entre dos sustancias empieza cuando una es retenida más fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil. las retenciones mencionadas pueden tener su origen en dos fenómenos de interacción que se dan entre las dos fases y que pueden ser :

1.-La adsorción que es la retención de una especie química por parte de los puntos activos de la superficie de un sólido quedando delimitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.

2.- La absorción que es la retención de una especie química por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera,absorción pura, o a reaccionar químicamente con la misma, absorción con reacción química, considerando ambas como un fenómeno másico y no superficial. (1)

VARIAS TECNICAS PARA LA SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS

Cromatografía en papel: Para la cromatografía en papel se coloca una gota de solución que contenga uno o más aminoácidos a unos 5 cm del borde de una tira depapel filtro, la tira se coloca en un vaso cerrado donde su extremo entra en contacto con un solvente después de la migración del solvente sobre el papel, se seca la tira, se trata con ninhidrina en acetona y se calienta un poco entonces las posiciones de los aminoácidos aparecen como puntos de color purpura.

Cromatografía en capa fina: Hay dos tipos distintos de cromatografía en capa fina (CCF): CCF de partición (CCFP) y CCF de absorción (CCFA). En la CCF de partición, la resolución implica partición de los elementos de una mezcla entre dos fases líquidas: una estacionaria y otra móvil de polaridad diferente. Conforme la fase móvil pasa sobre la estacionaria. La separación se produce por la diferencia de solubilidad de los componentes en las fases estacionarias y móvil. En la CCFP normal, la fase estacionaria es el componente más polar. El solvente desarrollado contiene ambos elementos: polares y débilmente no polares. Conforme se desplaza sobre la placa de apoyo, el solvente cambia de composición debido a los elementos más polares que acompañan a los grupos OH polares de la celulosa. Por tanto, el solvente que avanza paulatinamente se convierte en más no polar.

En la CCF de absorción la separación se basa en un principio totalmente diferente. La resolución implica absorber los componentes de la mezcla en gel de sílice que se calienta para expulsar toda el agua fija. La fase móvil, típicamente una mezcla simple o binaria de solventes orgánicos, desplaza los compuestos absorbidos compitiendo por los sitios de unión sobre el gel de sílice. Primero se desplazan los componentes unidos con menor firmeza y así se logra la resolución.

Cromatografía de intercambio iónico: se utiliza una columna corta y una larga las cuales contienen la forma ionizada de Na+ de una resina de poliestireno sulfonatada. Cuando el ácido hidrolizado a pH 2 se aplica a las columnas, los aminoácidos se unen mediante el intercambio de cationes con catión Na+. Las columnas se eluyen después con citrato de sodio bajo condiciones predeterminada de pH y temperatura. El material eluido se hace reaccionar con la solución de ninhidrina y las densidades de la coloración se miden en un colorímetro de flujo. Los datos aparecen en un tubo de rayos catódicos con integración relacionada con computadora de las áreas pico. (2)

MATERIALES

Papel de filtro (whatman no. 1) 1

Cámara cromatográfica 1

Tubos capilares 1

Estufa a 100ºc 1

Nebulizador 1

Regla 1

Tijera 1

REACTIVOS

Glicina

Arginina

Acido Aspartico

Alanina

Solución estándar de aminoácidos (0.1M)

Solución de ninhidrina al 0.1% en acetona

100 partes de n-butanol,

30 partes de acido formico

25 partes de agua.

PROCEDIMIENTO

Se tomo un papel de igual dimensiones, a este se le trazo una raya a 2.5cm del borde del papel esto se hizo a lo largo de las extremidades y se dividió a 0.5cm la línea guía del papel. Luego de tener estas referencias se procedió a aplicar una gota de cada aminoácido (Asp, Ala, Gly, Arg) en la superficie del papel

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