Bioquimica

Equipos y Materiales de laboratorios:

• Tubos de ensayo.

• Pipetas.

• Probetas.

• Estufas.

• Balanzas.

• Vasos de precipitados.

Reactivos:

• Cloroformo.

• Ácido sulfúrico.

• Anhídrido Acético.

• Cloruro de mercurio.

• Hidróxido de sodio.

Metodología:

• Reacción de Salkowski

En tubos de ensayo se agregó 0.5 g de cada muestra problema y se agregó 1 mL de cloroformo y 1 mL ácido sulfúrico concentrado, se procedió a mezclar suavemente y dejó separar las capas.

Ilustración 2. Reaccion con la prueba de Solkovsky.

• Reacción de Lieberman-Burchard

En diferentes tubos de ensayo se colocó alrededor de 1g de las muestras problemas, se añadió 10 gotas de anhídrido acético y 2 gotas de ácido sulfúrico concentrado, se mezcló cuidadosamente. Se pudo observar cambios de coloración en las muestras.

Ilustración 3. Reaccion de liberman-burchard.

PRUEBA DE IODO

• Reactivo de Hübl

Se disolvió 26 g de yodo en 50 mL de etanol 95%. Luego se disolvió 30 g de Cloruro de Mercurio II en 100 mL de etanol 95% y se procedió a mezclar, después se colocó en cada tubo alrededor de 1mL de las muestras problema, se procedió a añadir a cada tubo 1 mL de cloroformo y se mezcló, luego se colocó a cada tubo 1 mL del reactivo de Hübl se mezcló y se observó. La reacción se tornará positiva con la desaparición del color del yodo.

Ilustración 4. Prueba de Iodo.

• Prueba de saponificación

Se colocó en un beaker cerca de 8 mL de la muestra problema, luego se agregó a cada tubo 8 mL de hidróxido de sodio al 20% en un beaker, se agitó y llevó a baño María después se calentó en un vaso de precipitados y se agitó con varilla, hasta que se formó una solución jabonosa.

Ilustración 5. Presencia de una solución jabonosa.

• Prueba de Coloración

Se colocó en diferentes tubos de ensayo 2 mL de cada muestra problema luego se procedió a agregar 1 mL del colorante Sudán III se agitó, dejo en reposo y observó, los lípidos toman la coloración.

Ilustración 6. Presencia de lípidos debido a la coloración presentada.

Cuestionario:

Describa el fundamento de cada prueba desarrollada en el laboratorio.

Prueba de Salkowski

Si se colocan soluciones clorofórmicas de colesterol, sobre volúmenes iguales de ácido sulfúrico concentrado y se mezclan suavemente, aparece un color característico. Los componentes del reactivo se separan en dos capas, la de cloroformo de color rojo y la de ácido sulfúrico que emite una fluorescencia verdosa.

Prueba de Lieberman-Burchard

El anhídrido acético se condensa con el grupo OH en posición C-3 del colesterol, y de otros esteroles con el relacionado, para dar el correspondiente ester. Si el esterol original posee también un doble enlace tiene lugar una posterior epidermización deshidratación a la forma C-3, dando un color característico. De ahí que la reacción se considere prueba específica de los 3-hidroxiesteroides con doble enlace. La reacción se objetiva por la aparición de una coloración verdosa oscura que previamente pasó por diferentes colores, rosa, rojo, azul y violeta.

Reactivo de Hübl

Está formado por yodo en alcohol (con bicloruro de mercurio como catalizador). El yodo se fija sobre la cadena carbonada de los ácidos grasos etilénicos a razón de dos átomos por cada doble ligadura, por lo tanto el reactivo se decolora al perder yodo (mientras el ácido graso lo gana). (Scribs.2015).

Función de los lípidos en la membrana y pared celular.

El 98% de los lípidos presente en las membranas celulares son anfipático, es decir que presentan un extremo hidrófilo (que tiene afinidad e interacciona con el agua) y un extremo hidrofóbico (que repele el agua). Los más abundantes son los fosfoglicéridos (fosfolípidos) y los esfingolípidos, que se encuentran en todas las células; le siguen los glucolípidos, así como esteroides (sobre todo colesterol).

FOSFOLIPIDOS

Son estructuras divididas en dos partes principales que son la cabeza polar y las colas polares, estas última hidrofóbicas (no se disuelven en agua) y la cabeza hidrofílica contrario a las colas estas si se disuelven en presencia de agua. Estas moléculas se acomodan en la membrana en dos cadenas en las cuales las colas polares se extienden hacia el interior de la misma y las cabezas al exterior, esto basándose en las propiedades de hidrofobia e hidrofilia.

La cabeza polar está constituida por fosfatidilcolina que posee una pequeña molécula de colina unida a un grupo fosfato, por esta composición es que se da la característica de hidrofilia, por lo tanto no repelen el agua. La cabeza se une a las colas por medio del grupo fosfato.

Por otra parte las colas polares poseen propiedades hidrófobas, estas repelen el agua debido a que son lípidos y la principal característica de ellos es esta, su mayor componente son los esteroides (por ejemplo el colesterol presente en las membranas celulares animales), específicamente son dos cadenas de glicerol unidas a la cabeza, y se localizan hacia el interior de la membrana como una especie de sándwich.

La capacidad que poseen las cabezas para disolver se debe a que la totalidad o casi la totalidad de sus átomos están desprovistos de carga y son no polares, en consecuencia, estas moléculas no pueden crear uniones con moléculas de agua. Por lo tanto estos átomos no polares obligan a las moléculas de agua vecinas a reorganizarse para adoptar una estructura similar a la de una jaula alrededor de la molécula hidrófoba.

Las

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