“SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA”.

INSTITU                              [pic 1][pic 2]

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

“DR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL”

ACADEMIA DE METODOS DE ANÁLISIS

“SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS DE JUGOS DE FRUTOS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL EN CAPA FINA”

INTRODUCCIÓN:

La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria o lecho estacionario) mientras que la otra (fase móvil) se mueve en una dirección definida. El proceso cromatográfico se da como resultado de la mayor o menor capacidad para ser retenidos los diferentes componentes de una muestra por la fase estacionaria, es decir, se basa en los repetidos procesos de interacción durante el movimiento de los componentes de una mezcla arrastrados por la fase móvil a lo largo de la fase estacionaria (elución), produciéndose la separación debido a las diferencias en las constantes de distribución de los componentes de la mezcla entre la fase estacionaria y la móvil.

Por el mecanismo de separación se puede encontrar la cromatografía de adsorción, que  es una técnica particularmente útil para separar compuestos de polaridad baja o media. La separación de compuestos muy polares mediante cromatografía de adsorción requiere, debido a la gran retención que ofrecen, la utilización de adsorbentes muy poco activos, o bien, tratamientos químicos previos a fin de reducir su polaridad.

De acuerdo a la forma del  lecho cromatográfico podemos encontrar la cromatografía en capa en la que la fase estacionaria está en forma de plano o sobre un plano. Éste puede ser un papel, que sirva como tal o que esté impregnado con una sustancia que actúe de fase estacionaria (cromatografía en papel), o una capa de partículas sólidas extendida sobre un soporte, tal como una placa de vidrio o aluminio, la elución se consigue por el movimiento capilar ascendente de la fase móvil.

Las fases estacionarias utilizadas normalmente para cromatografía en capa fina son, alúmina o gel de sílice para cromatografía de adsorción y, celulosa para cromatografía de adsorción o de reparto. En la cromatografía en capa fina, se utiliza normalmente el análisis por desarrollo. El proceso se lleva a cabo en recipientes cerrados, por ascensión del disolvente, debiendo colocarse en el interior del recipiente cubriendo una de sus paredes una capa de papel de filtro impregnado en la fase móvil (disolvente) para conseguir una atmósfera saturada en ella. Una vez desarrollada la placa, la visualización de los cromatogramas  se realiza, caso de no tratarse de compuestos coloreados, mediante iluminación con luz ultravioleta, si la fase estacionaria lleva un indicador de fluorescencia, o bien mediante pulverizado de la placa con reveladores de carácter general (yodo, ácido sulfúrico, etc.) si se quieren visualizar únicamente compuestos de un tipo determinado.

Normalmente se utiliza una sola fase móvil sin embargo cuando desea analizar una mezcla muy compleja ocurre con frecuencia que ningún disolvente ni mezcla de solventes llega a separar todos los componentes como por ejemplo en el análisis de aminoácidos, por tanto se utilizan dos fases móviles, la técnica consiste en colocar en la esquina de la placa la muestra  y realizar una cromatografía normal, posteriormente se evapora la primera fase móvil y se gira 90° la placa  colocándola en una segunda fase móvil; dado que cada compuesto migra a una velocidad característica en un sistema de solventes determinado, la segunda cromatografía debería incrementar en grado sustancial la separación de la mezcla.

OBJETIVOS:

• Separar los aminoácidos presentes en jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.
• Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos.
• Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional.

RESULTADOS: 

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Ilustración 1 cromatografía en capa fina de  aminoácidos y problema (sandia) con una fase móvil de cloroformo-metanol-amoniaco17% (2:2:1)

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Ilustración 2 cromatografía en capa fina de aminoácidos y problema (sandia) con una fase móvil de butanol -ácido acético-agua (3:1:1)

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Ilustración 3 cromatografía bidimensional en capa fina de aminoácidos utilizando las 2 fases móviles que se utilizaron en las cromatografías anteriores

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Ilustración 4 cromatografía bidimensional en capa fina del problema (sandia) en donde se utilizaron las mismas fases móviles que en las cromatografías anteriores

Calculo del Rf[pic 8]

Tabla 1cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles

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